Produção de eritropoietina recombinante humana no leite de camundongas transgênicas (2009)
- Authors:
- Autor USP: MENDES, CAMILLA MOTA - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VRA
- Subjects: ERITROPOIETINA (HUMANO); CAMUNDONGOS; LEITE; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE
- Language: Português
- Abstract: Poteínas recombinantes simples, como a insulina e o hormônio de crescimento humano, podem ser produzidas em microorganismos como bactérias Entretanto, para a produção de proteínas que precisam de modificações pós-traducionais, que não se consegue em microorganismos, torna-se importante o uso de biorreatores com culturas de células eucarióticas. Este sistema de produção é caro e a quantidade de proteína produzida é pequena. Como alternativa surgiu o uso de animais transgênicos para reduzir os custos de produção. A Eritropoietina humana é uma proteina glicosilada e representa um dos maiores gastos para tratamento de doenças humanas. Já foi produzida em camundongos, coelhos e suínos transgênicos, com problemas na glicosilação ou alteração da higidez do animal pela falha da região promotora do vetor de transgene em limitar a expressão para a glâmdula mamária. Este estudo teve como objetivo a produção de (rhEPO) no leite de camundongas transgênicas sob ação de dois diferentes vetores, nunca utilizados na sua produção. Os vetores com os promotores da alfa-lactalbumina e beta-lactoglobulina bovinos tiveram o gene da eritropoietina humana inserido entre as regiões promotora e codificadora do leite, num processo trabalhoso e pouco eficiente. Não foi possível inserir os vetores serão nas células tronco-embrionárias (CTE) de camundongos (USP-1) por eleroporação, mas as condições (390V por 80µs) foram testadas com vetor de fluorescência. Futuramente as CTE transgênicas serãoagregadas aos embriões colhidos de camundongas superovuladas e após 24 horas de cultivo in vitro serão transferidos para camundongas pseudo-gestantes. Os animais nascidos (quimeras) serão acasalados e seus descendentes terão o DNA analisado para verificar a presença do gene da eritropoietina humana. Os animais positivos (fundadores) serão acasalados e as fêmeas positivas nascidas serão acompanhadas quanto à ) produção da eritropoietina humana no leite. Será purificada do leite, quantificada e avaliada quanto a glicosilação por Western Blottin.
- Imprenta:
- Data da defesa: 27.02.2009
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ABNT
MENDES, Camilla Mota; VISINTIN, José Antônio. Produção de eritropoietina recombinante humana no leite de camundongas transgênicas. 2009.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2009. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-29052009-134917/ >. -
APA
Mendes, C. M., & Visintin, J. A. (2009). Produção de eritropoietina recombinante humana no leite de camundongas transgênicas. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-29052009-134917/ -
NLM
Mendes CM, Visintin JA. Produção de eritropoietina recombinante humana no leite de camundongas transgênicas [Internet]. 2009 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-29052009-134917/ -
Vancouver
Mendes CM, Visintin JA. Produção de eritropoietina recombinante humana no leite de camundongas transgênicas [Internet]. 2009 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-29052009-134917/ - Fertilization rate and developmental kinetics of bovine embryos produced using semen from high and low in vitro fertility bulls
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