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Estudo da região promotora do gene do permutador Na+/H+ (NHE3) (2009)

  • Authors:
  • Autor USP: NERI, ELIDA ADALGISA - ICB
  • Unidade: ICB
  • Sigla do Departamento: BMB
  • Subjects: TROCA IÔNICA; FATORES DE TRANSCRIÇÃO; BIOLOGIA MOLECULAR; FISIOLOGIA RENAL; FISIOLOGIA
  • Language: Português
  • Abstract: Tendo em vista a importância do permutador Na+/H+ (isoforma 3) na reabsorção de NaCl e NaHCO3 em túbulos proximais e conseqüentemente no equilíbrio ácido-base e volume celular, surgiu o interesse em identificar a região promotora essencial para a transcrição do gene NHE3 e os elementos de ligação de fatores de transcrição presentes no mesmo, em células de túbulos proximais renais. Para isso, os segmentos da região flanqueadora 5´ do gene NHE3 de rato foram obtidos por PCR e inseridos no plasmídeo pGL3-basic, que codifica o gene repórter Firefly lucíferase. Os seguintes fragmentos foram analisados 1) -157 a +31; 2) -152 a +55; 3) -85 a +31; 4) -65 a +31; 5) -44 a +31; 6) -33 a +31; 7) -25 a +31; 8) -157 a +35, com deleção do elemento GATA (posição +20 a +23). Estes foram transfectados em células OKP, uma linhagem de túbulos proximais de rim de opossum. A atividade promotora de transcrição de cada segmento foi analisada em comparação com a atividade de luciferase observada com a transfecção do vetor pGL3-basic não recombinante, sem promotor. Foi realizado a cotransfecção do vetor pRL-CMV, que contém o gene da proteína repórter Renilla luciferase, usado como controle da eficiência de transfecção. Após serem analisados os resultados, observou-se que a atividade do promotor foi mais elevada com o constructo -152 a +55 (76.52 ± 45.26 (n=9)). Além disso, conseguimos identificar a existência de possíveis ativadores transcricionais no segmento entre a posição -85 e -65(Egr-1/Sp1); -44 e -33 (Egr-1) e -33 e -25 (elemento TATA-Box não canônico), pois a remoção destes nucleotídeos reduziu significativamente a atividade do promotor. Outra observação foi a presença de elementos inibitórios entre as bases -65 e -44 (Sp1/Ap2), pois com a retirada destes, observamos um aumento muito significativo da atividade do promotor. ) O menor segmento (-25/+31) apresentou atividade promotora significativa, sugerindo que ainda tenha os elementos indispensáveis para a montagem do complexo transcricional primário, embora com eficiência já bem reduzida. A presença do elemento GATA no primeiro exon, embora importante para a transcrição do gene NHE3 em células intestinais, não parece ser importante para a atividade transcricional em células de túbulos proximais
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 29.04.2009
  • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      NERI, Elida Adalgisa; REBOUÇAS, Nancy Amaral. Estudo da região promotora do gene do permutador Na+/H+ (NHE3). 2009.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2009. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42137/tde-01072009-104645/ >.
    • APA

      Neri, E. A., & Rebouças, N. A. (2009). Estudo da região promotora do gene do permutador Na+/H+ (NHE3). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42137/tde-01072009-104645/
    • NLM

      Neri EA, Rebouças NA. Estudo da região promotora do gene do permutador Na+/H+ (NHE3) [Internet]. 2009 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42137/tde-01072009-104645/
    • Vancouver

      Neri EA, Rebouças NA. Estudo da região promotora do gene do permutador Na+/H+ (NHE3) [Internet]. 2009 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42137/tde-01072009-104645/

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