Caracterização funcional e estrutural de uma fosfolipase A2 ácida isolada do veneno de Bothrops pirajai (2009)
- Authors:
- Autor USP: TEIXEIRA, SABRINA SCHAAF - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: S/D
- Subjects: TOXINAS EM ANIMAL; FOSFOLIPASES A; CLONAGEM; TOXICOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: A caracterização proteômica de venenos de serpentes contribui significativamente para o avanço das Ciências na área Biomédica. Várias destas moléculas, utilizadas como instrumentos de investigação de mecanismos celulares e moleculares, estão envolvidas em diversos processos fisiopatológicos e de intoxicação. No entanto, os venenos de serpentes ainda requerem caracterização funcional e/ou biológica adicionais. As fosfolipases A IND. 2 s (PLAA IND. 2 s) são enzimas que induzem vários efeitos farmacológicos, e geralmente, correspondem a maior porcentagem do conteúdo protéico dos venenos de serpentes. Desta forma, o isolamento e a caracterização bioquímica, funcional e estrutural de PLAA IND. 2 s poderão gerar informações importantes para o melhor entendimento dos efeitos farmacológicos e de intoxicação ocasionados por estas proteínas. Este trabalho descreve o isolamento e a caracterização bioquímica, enzimática, funcional e estrutural da primeira PLAA IND. 2 Asp49 ácida, denominada Bpir-I-PLA IND. 2, isolada do veneno da serpente Bothrops pirajai, espécie endêmica da região Sul do Estado da Bahia e atualmente, integrante da Lista Nacional das Espécies da Fauna Brasileira Ameaçadas de Extinção. O isolamento da Bpir-I-PLA IND. 2 foi realizada através de dois passos cromatográficos, envolvendo inicialmente cromatografia de troca iônica, seguida de HPLC de fase reversa. Quanto submetidas à eletroforese em gel de poliacrilamida para proteínas ácidas,Bpir-I-PLA IND. 2 apresentou alto grau de homogeneidade. A massa molecular relativa, determinada através de eletroforese em gel de poliacrilamida com agente desnaturante, foi de aproximadamente 28.000 para a forma de dímero e 14.500 para o monômero. A focalização isoelétrica demonstrou uma única banda para a fosfolipase A IND. 2, revelando p/ aproximado de 4,9. A região N-terminal de Bpir-I-PLA IND. 2, seqüenciada através do método de degradação de ) Edman, apresentou elevada homologia entre outras PLAA IND. 2 s de venenos de serpentes. A composição de amioácidos da proteína corroborou com sua característica ácida, apresentando um elevado conteúdo de aminoácidos carregados negativamente. A enzima apresentou elevada atividade fosfolipásica e induziu edema moderado in vivo. Além disso, Bpir-I-PLA IND. 2 foi capaz de inibir a agregação plaquetária e a coagulação do plasma, e também induzir efeito hipotensor in vivo e citotóxico sobre células tumorais, bactérias, fungos e leshmanias. O tratamento da enzima com o reagente brometo de p-bromofenacila neutralizou as atividades enzimática, inibitória sobre a agregação plaquetária, anticoagulante, hipotensora e antitumoral. A moderada atividade edematogênica foi p~rcialmente inibida. O cDNA contendo 366 bp (BPIR-A) que codifica a proteína Bpir-I-PLA IND. 2 foi clonado e a proteína recombinante, expressa. Bpir-I-PLA IND. 2 recombinante apresentou a mesma sequência de aminoácidos, estrutura secundária,atividade fosfolipásica e efeito inibitório sobre plaquetas, observados para a proteína nativa Bpir-I-PLA IND. 2, sugerindo que a recPLA IND. 2 foi eficientemente expressa e purificada. Devido à baixa toxicidade demonstrada, a Bpir-I-PLA IND. 2 pode tornar-se uma ferramenta importante nos estudos das desordens da coagulação, como também um potencial modelo para a elaboração de novos fármacos para uso na clínica-médica
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2009
- Data da defesa: 04.03.2009
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ABNT
TEIXEIRA, Sabrina Schaaf. Caracterização funcional e estrutural de uma fosfolipase A2 ácida isolada do veneno de Bothrops pirajai. 2009. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-10032009-162342/. Acesso em: 03 out. 2024. -
APA
Teixeira, S. S. (2009). Caracterização funcional e estrutural de uma fosfolipase A2 ácida isolada do veneno de Bothrops pirajai (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-10032009-162342/ -
NLM
Teixeira SS. Caracterização funcional e estrutural de uma fosfolipase A2 ácida isolada do veneno de Bothrops pirajai [Internet]. 2009 ;[citado 2024 out. 03 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-10032009-162342/ -
Vancouver
Teixeira SS. Caracterização funcional e estrutural de uma fosfolipase A2 ácida isolada do veneno de Bothrops pirajai [Internet]. 2009 ;[citado 2024 out. 03 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-10032009-162342/
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