Expressão de proteínas virais do parvovirus humano B19 em sistema Pichia pastoris, o parvovírus B19 (2008)
- Authors:
- Autor USP: VICENTE, ELISABETE JOSE - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Inglês
- Abstract: O parvovírus B19 é o agente causador de vários quadros clínicos incluindo eritemas infecciosos em crianças, hidropsia fetal em mulheres gestantes, anemia crônica e crise aplástica transitória. A levedura P. pastoris é um sistema de expressão muito empregado na produção de várias proteínas heterólogas. O objetivo deste trabalho foi expressar as proteínas VP1 e VP2 do parvovírus humano B19 na levedura P. pastoris. As seqüências codificadoras de VP1 e VP2 foram amplificadas por PCR, usando DNA total viral, os produtos obtidos foram inicialmente subclonados no vetor pGEM-TEasy. Os fragmentos de DNA foram digeridos EcoRI e NotI, purificados e inseridos no vetor de expressão e excreção de P. pastoris pPIC9K, entre os sítios EcoRI e NotI. Os plasmídios recombinantes foram linearizados com SalI e introduzido na linhagem P. pastoris GS115 (his4), por eletroporação, resultando em transformantes com fenótipo Mut+. Para a expressão das proteínas VP1 e VP2 do vírus B19, os clones recombinantes foram crescidos em glicerol, e a indução das proteínas foi realizada mediante adição de metanol, inicialmente em frascos erlenmeyers agitados. Este procedimento permitiu a seleção dos clones recombinantes: GS115/pPIC9K (controle negativo), GS115/pPIC9K-VP113, GS115/pPIC9K-VP119, GS115/pPIC9K-VP205, GS115/pPIC9K-VP210 que expressaram os maiores níveis das proteínas recombinantes VP1 e VP2. Estes clones recombinantes foram empregados na expressão em biorreator de 4L. A expressão de cadaum dos antígenos VP1 e VP2 recombinantes foi analisada por SDS-PAGE e as atividades biológicas foram confirmadas pelos ensaios imunológicos ELISA, "Dot-Blot" e "Western Blot".
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- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso sobre Diversidade Microbiana da Amazônia
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ABNT
SILVA FILHO, C. G. e VICENTE, Elisabete José. Expressão de proteínas virais do parvovirus humano B19 em sistema Pichia pastoris, o parvovírus B19. 2008, Anais.. Manaus: Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, 2008. . Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Silva Filho, C. G., & Vicente, E. J. (2008). Expressão de proteínas virais do parvovirus humano B19 em sistema Pichia pastoris, o parvovírus B19. In Resumos. Manaus: Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo. -
NLM
Silva Filho CG, Vicente EJ. Expressão de proteínas virais do parvovirus humano B19 em sistema Pichia pastoris, o parvovírus B19. Resumos. 2008 ;[citado 2024 abr. 23 ] -
Vancouver
Silva Filho CG, Vicente EJ. Expressão de proteínas virais do parvovirus humano B19 em sistema Pichia pastoris, o parvovírus B19. Resumos. 2008 ;[citado 2024 abr. 23 ] - Clones recombinantes retrotransformantes obtidos em linhagens de leveduras Saccharomyces cerevisiae transformadas com plasmídio bifuncional PGTY-glico
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