Efeito da suramina na atividade da fosfolipase A2 secretada humana do grupo IIA (2008)
- Authors:
- Autor USP: ARAGÃO, ELISÂNGELA APARECIDA - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 593
- Subjects: COMPOSTOS ORGÂNICOS; LIPOSSOMOS
- Keywords: Atividade bactericida; Danificação de membranas; Fosfolipases A2; Mutagênese sítio dirigida; Suramina; Bactericidal activity; Membrane damage; Phospholipase A2; Site-directed mutagenesis; Suramin
- Language: Português
- Abstract: Suramina é um naftiluréia polissufonado extensivamente usado como uma droga antiprotozoária que apresenta atividade inibitória contra uma variedade de enzimas. Neste trabalho nós temos avaliado o efeito da suramina nas atividades contra membranas biológicas e artificiais da fosfolipase A2 humana secretada do grupo liA ('hsPLA IND.2' gIIA), uma proteína envolvida em processos inflamatórios. As proteínas mutantes da região do sítio ativo e de resíduos catiônicos na superfície da proteína que interage com a membrana foram expressas em E. coli e enoveladas de corpos de inclusão para mapear os sítios de ligação da suramina na proteína. A ativação de células de macrófagos da linhagem RA W 264.7 pela ação da 'hsPLA IND.2' gllA foi monitorada pela liberação de óxido nítrico e a atividade bactericida da proteína contra Micrococcus Zuteus foi avaliada pela contagem de colônias e pela técnica de citometria de fluxo. A atividade hidrolítica da 'hsPLA IND.2' glIA, avaliada pela mistura lipídica de dioleoil fosfatidilcolina/dioleoil fosfatidilglicerol' (DOPC/DOPG), foi inibida pela concentração de 100 nM de suramina. Além disso, a ativação de macrófagos foi abolida pela razão molar de proteína/suramina onde a atividade hidrolítica da enzima foi inibida. Em contraste, ambas as atividades bactericida da 'hsPLA IND.2' glIA contra M Zuteus e de permeabilização da membrana interna bacteriana não foram afetadas pela suramina em concentrações até 50 µM. Testes de afinidade dainteração do complexo suramina/'hsPLA IND.2' glIA foram feitos através da técnica de fluorescência e as proteínas mutantes KI5A, K38A, R54A e K123A apresentaram uma redução na afinidade pela suramina. A ligação do complexo suramina/'hsPLA IND.2' glIA foi posteriormente investigada por simulações de dinâmica molecular, a qual indicou duas conformações desse complexo que são predominantemente mediadas por interações eletrostáticas entre grupos sulfatos com cadeias laterais de aminoácidos na região do sítio ativo e dos resíduos em toma das posições 15 e 116 localizados na N- e C- terminal, respectivamente. Todos os três sítios de ligação estão localizados na superfície de reconhecimento do substrato e estes resultados estão correlacionados com os dados de calorimetria de titulação isotérmica, a qual demonstrou 2.7 sítios de ligação da suramina na' hsPLA IND.2' gIlA. Estes resultados sugerem que a suramina pode representar uma nova classe de inibidor de fosfolipase 'A IND.2'
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2008
- Data da defesa: 19.12.2008
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ABNT
ARAGÃO, Elisângela Aparecida. Efeito da suramina na atividade da fosfolipase A2 secretada humana do grupo IIA. 2008. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2008. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-26052009-181259/. Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Aragão, E. A. (2008). Efeito da suramina na atividade da fosfolipase A2 secretada humana do grupo IIA (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-26052009-181259/ -
NLM
Aragão EA. Efeito da suramina na atividade da fosfolipase A2 secretada humana do grupo IIA [Internet]. 2008 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-26052009-181259/ -
Vancouver
Aragão EA. Efeito da suramina na atividade da fosfolipase A2 secretada humana do grupo IIA [Internet]. 2008 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-26052009-181259/
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