Modulação da proteína atr através de interferência por RNA em células deficientes em reparo de DNA (2008)
- Authors:
- Autor USP: MENCK, CARLOS FREDERICO MARTINS - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivos: O DNA por natureza é uma molécula instável. Assim, agentes endógenos e exógenos desafiam constantemente a estabilidade do genoma. Em resposta a danos no DNA, as células de mamíferos ativam vias que coordenam transições do ciclo celular (checkpoints), reparo de DNA e apoptose. A quinase ATR é a grande reguladora nessa resposta celular após danos induzidos por luz ultravioleta (UV). Entretanto, como ATR e os processos de tolerância e reparo de DNA são coordenados, não são totalmente compreendidos. Através da interferência por RNA é possível diminuir a expressão de uma protéina específicamente, fornecendo uma excelente ferramenta para estudar o papel desta. Dessa maneira, buscamos modular a proteína ATR em células deficientes em reparo com o objetivo de produzir duplos mutantes capazes de elucidar a interação desses processos na resposta de danos no DNA.Material e Métodos: RNAs de dupla fita (siRNA) específicos para o gene ATR foram sintetizados e transfectados em culturas imortalizadas de fibroblastos humanos, proficientes e deficientes em reparo de DNA. O nível proteico foi estimado em diferentes tempos após a transfecção através de imunodetecção por citometria de fluxo e por western blot. Ensaios de sobrevivência clonogênica com UVB e de citometria foram realizados para confirmar o efeito fenotípico do silenciamento.Conclusões: Conseguimos identificar sequências de siRNA que inibem efetivamente o RNAm e a expressão da proteína ATR em células humana.Conseguimos evidências de que há um efeito fenotípico nas células transfectadas, indicando que o silenciamento de ATR por siRNA sensibiliza as células à irradiação UVB. Com esta poderosa ferramenta será possível estudar a interação entre ATR e vias de reparo, compreendendo melhor a resposta a danos no DNA.
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2008
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo
-
ABNT
ANDRADE-LIMA, L. C. et al. Modulação da proteína atr através de interferência por RNA em células deficientes em reparo de DNA. 2008, Anais.. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2008. . Acesso em: 19 mar. 2024. -
APA
Andrade-Lima, L. C., Lima-Bessa, K. M., Andrade, L. N., & Menck, C. F. M. (2008). Modulação da proteína atr através de interferência por RNA em células deficientes em reparo de DNA. In Resumos. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP. -
NLM
Andrade-Lima LC, Lima-Bessa KM, Andrade LN, Menck CFM. Modulação da proteína atr através de interferência por RNA em células deficientes em reparo de DNA. Resumos. 2008 ;[citado 2024 mar. 19 ] -
Vancouver
Andrade-Lima LC, Lima-Bessa KM, Andrade LN, Menck CFM. Modulação da proteína atr através de interferência por RNA em células deficientes em reparo de DNA. Resumos. 2008 ;[citado 2024 mar. 19 ] - Restoring DNA repair capacity of cells from three distinct diseases by XPD gene-recombinant adenovirus
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