Exportar registro bibliográfico

Atividade da fostolipase A 'IND. 2' secretada humana do grupo IID ('hsPLA IND. 2'-IID) contra membranas artificiais e biológicas (2008)

  • Authors:
  • Autor USP: FONSECA, RAQUEL GOMES - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBI
  • Subjects: FOSFOLIPASES; MUTAGÊNESE; PROTEÍNAS (ESTRUTURA)
  • Language: Português
  • Abstract: As fosfolipases 'A IND. 2' ('PLA IND. 2's, EC 3.1.1.4) são enzimas envolvidas em uma ampla variedade de processos fisiológicos que compreendem digestão fosfolipídica, remodelagem de membranas, regulação do sistema imunológico e processos patofisiológicos. As 'PLA IND. 2's secretadas do grupo II (s'PLA IND. 2'-II) são proteínas do sistema imune presentes na resposta de fase aguda e na atividade bactericida, participando na ativação e liberação de citocinas e de outros mediadores pré-inflamatórios. Apesar dos estudos recentes sobre os efeitos farmacológicos e mecanismo catalítico da'PLA IND. 2' do grupo lIA humana (hs'PLA IND. 2'-IIA), pouca atenção tem sido dada à 'PLA IND. 2' do grupo IID humana (hs'PLA IND. 2'-IID), uma proteína associada ao progresso do processo inflamatório. O presente trabalho representa um estudo para avaliar uma eventual correlação entre o mecanismo de permeabilização de membranas modelos e a atividade bactericida de hs'PLA IND. 2'-IID. A seqüência codificadora da hs'PLA IND. 2'-IID foi inserida no vetor de expressão pET3a, e a proteína heteróloga foi produzida na forma de corpos de inclusão em EscherIchia coli BL21 (DE3). Um protocolo de enovelamento da proteína recombinante foi desenvolvido que permitiu a produção de hs'PLA IND. 2'-IID na conformação nativa. Para avaliar o papel de atividade catalítica no efeito de permeabilização de membranas modelos e na atividade bactericida, as mutantes H48Q, D49K e G30S na região desitio ativo foram produzidos com o intuito de reduz ou eliminar a atividade catalítica da enzima. A proteína hs'PLA IND. 2'-IID tipo selvagem e a mutante H48Q apresentaram atividade hidrolítica de 58,45 e 7,7 'mü'M.'min POT. -1'.'mg POT. -1' respectivamente, e demonstraram uma atividade de danificação de membranas artificiais. Em contraste, as mutantes G30S e D49K perderam completamente a atividade catalítica, mas mantiveram a capacidade de danificar membranas artificiais, demonstrando que a atividade hidrolítica e a danificação de membranas modelos não estão correlacionadas. A proteína hs'PLA IND. 2'-IID tipo selvagem demonstrou um efeito bactericida contra bactérias Gram-negativa (E. coli K12) e Gram-positiva (Micrococcus luteus). As mutantes H48Q e D49K reduziram, mas não aboliram a atividade bactericida contra a E. coli, demonstrando que a atividade independente da atividade catalítica contribui para o efeito contra este linhagem. As mesmas mutantes causam uma redução maior na atividade contra M. luteus, mostrando que os mecanismos do efeito bactericida são diferentes entre bactérias Gram negativas e positivas. Os efeitos das mutações da hs'PLA IND. 2'-IID foram comparados com os efeitos das mesmas mutações na hs'PLA IND. 2'-IIA e com botropstoxina-l, uma Lys49-'PLA IND. 2' isolado do veneno da serpente Bothrops jararacussu, indicando que além da atividade catalítica e a atividade independente de catalise, acesso a membranainterna da bactéria pode ser um fator na determinação da atividade bactericida das fosfolipases 'A IND. 2' de classe II
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 19.11.2008

  • How to cite
    A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas

    • ABNT

      FONSECA, Raquel Gomes; WARD, Richard John. Atividade da fostolipase A 'IND. 2' secretada humana do grupo IID ('hsPLA IND. 2'-IID) contra membranas artificiais e biológicas. 2008.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2008.
    • APA

      Fonseca, R. G., & Ward, R. J. (2008). Atividade da fostolipase A 'IND. 2' secretada humana do grupo IID ('hsPLA IND. 2'-IID) contra membranas artificiais e biológicas. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Fonseca RG, Ward RJ. Atividade da fostolipase A 'IND. 2' secretada humana do grupo IID ('hsPLA IND. 2'-IID) contra membranas artificiais e biológicas. 2008 ;
    • Vancouver

      Fonseca RG, Ward RJ. Atividade da fostolipase A 'IND. 2' secretada humana do grupo IID ('hsPLA IND. 2'-IID) contra membranas artificiais e biológicas. 2008 ;


Digital Library of Intellectual Production of Universidade de São Paulo     2012 - 2021