Atividade da fostolipase A 'IND. 2' secretada humana do grupo IID ('hsPLA IND. 2'-IID) contra membranas artificiais e biológicas (2008)
- Authors:
- Autor USP: FONSECA, RAQUEL GOMES - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Subjects: FOSFOLIPASES; MUTAGÊNESE; PROTEÍNAS (ESTRUTURA)
- Language: Português
- Abstract: As fosfolipases 'A IND. 2' ('PLA IND. 2's, EC 3.1.1.4) são enzimas envolvidas em uma ampla variedade de processos fisiológicos que compreendem digestão fosfolipídica, remodelagem de membranas, regulação do sistema imunológico e processos patofisiológicos. As 'PLA IND. 2's secretadas do grupo II (s'PLA IND. 2'-II) são proteínas do sistema imune presentes na resposta de fase aguda e na atividade bactericida, participando na ativação e liberação de citocinas e de outros mediadores pré-inflamatórios. Apesar dos estudos recentes sobre os efeitos farmacológicos e mecanismo catalítico da'PLA IND. 2' do grupo lIA humana (hs'PLA IND. 2'-IIA), pouca atenção tem sido dada à 'PLA IND. 2' do grupo IID humana (hs'PLA IND. 2'-IID), uma proteína associada ao progresso do processo inflamatório. O presente trabalho representa um estudo para avaliar uma eventual correlação entre o mecanismo de permeabilização de membranas modelos e a atividade bactericida de hs'PLA IND. 2'-IID. A seqüência codificadora da hs'PLA IND. 2'-IID foi inserida no vetor de expressão pET3a, e a proteína heteróloga foi produzida na forma de corpos de inclusão em EscherIchia coli BL21 (DE3). Um protocolo de enovelamento da proteína recombinante foi desenvolvido que permitiu a produção de hs'PLA IND. 2'-IID na conformação nativa. Para avaliar o papel de atividade catalítica no efeito de permeabilização de membranas modelos e na atividade bactericida, as mutantes H48Q, D49K e G30S na região desitio ativo foram produzidos com o intuito de reduz ou eliminar a atividade catalítica da enzima. A proteína hs'PLA IND. 2'-IID tipo selvagem e a mutante H48Q apresentaram atividade hidrolítica de 58,45 e 7,7 'mü'M.'min POT. -1'.'mg POT. -1' respectivamente, e demonstraram uma atividade de danificação de membranas artificiais. Em contraste, as mutantes G30S e D49K perderam completamente a atividade catalítica, mas mantiveram a capacidade de danificar membranas artificiais, demonstrando que a atividade hidrolítica e a danificação de membranas modelos não estão correlacionadas. A proteína hs'PLA IND. 2'-IID tipo selvagem demonstrou um efeito bactericida contra bactérias Gram-negativa (E. coli K12) e Gram-positiva (Micrococcus luteus). As mutantes H48Q e D49K reduziram, mas não aboliram a atividade bactericida contra a E. coli, demonstrando que a atividade independente da atividade catalítica contribui para o efeito contra este linhagem. As mesmas mutantes causam uma redução maior na atividade contra M. luteus, mostrando que os mecanismos do efeito bactericida são diferentes entre bactérias Gram negativas e positivas. Os efeitos das mutações da hs'PLA IND. 2'-IID foram comparados com os efeitos das mesmas mutações na hs'PLA IND. 2'-IIA e com botropstoxina-l, uma Lys49-'PLA IND. 2' isolado do veneno da serpente Bothrops jararacussu, indicando que além da atividade catalítica e a atividade independente de catalise, acesso a membranainterna da bactéria pode ser um fator na determinação da atividade bactericida das fosfolipases 'A IND. 2' de classe II
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2008
- Data da defesa: 19.11.2008
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ABNT
FONSECA, Raquel Gomes. Atividade da fostolipase A 'IND. 2' secretada humana do grupo IID ('hsPLA IND. 2'-IID) contra membranas artificiais e biológicas. 2008. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2008. . Acesso em: 30 dez. 2025. -
APA
Fonseca, R. G. (2008). Atividade da fostolipase A 'IND. 2' secretada humana do grupo IID ('hsPLA IND. 2'-IID) contra membranas artificiais e biológicas (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Fonseca RG. Atividade da fostolipase A 'IND. 2' secretada humana do grupo IID ('hsPLA IND. 2'-IID) contra membranas artificiais e biológicas. 2008 ;[citado 2025 dez. 30 ] -
Vancouver
Fonseca RG. Atividade da fostolipase A 'IND. 2' secretada humana do grupo IID ('hsPLA IND. 2'-IID) contra membranas artificiais e biológicas. 2008 ;[citado 2025 dez. 30 ]
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