Tese

Identificação de genes regulados pelo mecanismo de metilação durante a expansão de células-tronco mesenquimais e na fase inicial da osteogênese (2008)

• Authors:
  • Lima, Patrícia Santos Pereira
  • Silva Júnior, Wilson Araújo da (Orientador)
• Autor USP: LIMA, PATRÍCIA SANTOS PEREIRA - FMRP
• Unidade: FMRP
• Sigla do Departamento: RGE
• Subjects: CÉLULAS-TRONCO; OSTEOGÊNESE; GENES DE RESPOSTA IMUNE
• Language: Português
• Abstract: A medula óssea de adultos contém células-tronco mesenquimais (CTMs) que atuam na regeneração dos tecidos mesenquimais tais como ósseo, cartilaginoso, adiposo e muscular, além de ligamentos e tendões. Essas características elegem as CTMs como excelentes candidatas para o uso nos protocolos de medicina regenerativa. Os aspectos moleculares que governam a regulação para cada via de diferenciação são uma área de investigação ainda em estudo e a identificação de genes cuja expressão promova, por exemplo, a diferenciação osteoblástica ou iniba a diferenciação em outros tipos celulares é uma estratégia amplamente utilizada no esforço para a compreensão dos processos moleculares envolvidos na diferenciação tecidual. O objetivo deste estudo é identificar genes regulados pelo mecanismo de metilação durante a expansão e a diferenciação inicial em osteoblastos das CTMs. As CTMs foram obtidas da medula óssea de dois diferentes doadores, expandidas e tratadas por quatro dias com o agente demetilante 5-aza-2'-deoxicitidina. A diferenciação osteogênica foi estimulada por sete dias, sendo os quatro últimos dias de tratamento. Todos os experimentos foram realizados com seus respectivos controles. Ao final dos quatro dias de tratamento, as células foram coletadas para extração de RNA e DNA. Para a identificação de genes com expressão aumentada após o tratamento foi utilizada a plataforma de microarrays CodeLink. A validação da expressão dos genes selecionados foi realizada por RT-PCR em tempo real e o padrão de metilação da região promotora dos genes foi analisado por seqüenciamento após a modificação do DNA pelo bissulfito de sódio. Três genes de cada etapa foram selecionados para a análise: os genes FBLN2, LAMB2 e ADFP na expansão e na diferenciação foram selecionados TBKBP1, ARHGEF17 e ALPL. Os genes SAA2 e MMP7, cuja expressão aumentou durante a diferenciação (amostras controle), também foram selecionados. A expressão de todos os genes foi validada por qRT-PCR embora, em muitos casos, a diferença de expressão entre as amostras tratada e controle tenha sido maior pela metodologia do microarray. No entanto, a expressão destes genes nas amostras de diferentes indivíduos foi semelhante, com exceção para os genes ADFP e ALPL. A análise de metilação na ilha CpG dos genes FBLN2, LAMB2, ADFP e ALPL revelou a presença de metilação apenas na ilha CpG do gene FBLN2. A diminuição na densidade de metilação do gene FBLN2 favoreceu o aumento da sua expressão, embora a metilação não pareça ser o único mecanismo responsável pela expressão deste gene. O aumento da expressão de genes que codificam para componentes da matriz extracelular (FBLN2, LAMB2, SAA2 e MMP7) e de genes relacionados à diferenciação celular (ADFP e ALPL) assim como o perfil destas expressões após os sete dias de diferenciação em osteoblastos, indicam que a hipometilação favorece a diferenciação das CTMs
• Imprenta:
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2008
• Data da defesa: 13.10.2008

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How to cite

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• ABNT

  LIMA, Patrícia Santos Pereira. Identificação de genes regulados pelo mecanismo de metilação durante a expansão de células-tronco mesenquimais e na fase inicial da osteogênese. 2008. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2008. . Acesso em: 11 out. 2024.

• APA

  Lima, P. S. P. (2008). Identificação de genes regulados pelo mecanismo de metilação durante a expansão de células-tronco mesenquimais e na fase inicial da osteogênese (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

• NLM

  Lima PSP. Identificação de genes regulados pelo mecanismo de metilação durante a expansão de células-tronco mesenquimais e na fase inicial da osteogênese. 2008 ;[citado 2024 out. 11 ]

• Vancouver

  Lima PSP. Identificação de genes regulados pelo mecanismo de metilação durante a expansão de células-tronco mesenquimais e na fase inicial da osteogênese. 2008 ;[citado 2024 out. 11 ]

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