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Investigação sobre elementos envolvidos no controle de expressão gênica em Leishmania: os genes das fosfoglicerato-quinases como modelo (2008)

  • Authors:
  • Autor USP: AZEVEDO, ALINE DE - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBP
  • Subjects: LEISHMANIA; EXPRESSÃO GÊNICA
  • Language: Português
  • Abstract: Nosso objetivo central foi estudar o controle de expressão dos genes que codificam as isoformas citosólica (PGKB) e glicossômica (PGKC) da fosfoglicerato quinase de Leishmania major. Em estudo anterior mostramos que transfectantes supe-expressores de PGKC apresentavam um número baixo de cópias do plasmídeo e de seus transcritos quando comparado aos transfectantes super-expressores da isoforma citosólica (PGKB) e controles. Paradoxalmente, a quantidade de proteínas, avaliada por imunodetecção, não mantém correlação com os níveis dos transcritos. Esses dados nos deram suporte para investigar a existência de elementos controladores de replicação, transcrição e/ou tradução do plasmídeo. Tendo como hipótese que as regiões 5' ou 3' não traduzidas (UTRs) do PGKC poderiam estar envolvidas no controle de expressão desse gene, construímos dois recombinantes quiméricos portando a região 5' de um dos PGKs ligada à região. 3' do outro e vice-versa. As quimeras foram transfectadas em L. major e caracterizadas quanto ao comportamento em cultura, número de cópias do plasmídeo, nível e estabilidade do transcrito e nível e estabilidade da proteína. Nossos resultados indicam que é necessária a presença concomitante das 5' e 3' UTRs do PGKC para manter baixo o número de cópias do recombinante, baixos níveis de transcrito e alta a estabilidade do transcrito nos transfectantes estudados. A maior estabilidade do transcrito PGKC deve contribuir para a maior abundância da proteínacompartimentalizada no glicossomo, sem qualquer contribuição da estabilidade da proteína compartimentalizada, que é inferior à da isoforma citosólica. Além disso, para investigarmos se as regiões flanqueadoras do PGKC atuam controlando a expressão de outros genes que não estejam envolvidos na via glicolítica e que não sejam endereçados ao glicossomo, geramos um recombinante no qual o gene que codifica a higromicina fosfotransferase (HFT) foi inserido em fase de leitura com o PGKC, em sua porção central. Estes recombinantes foram transfectados em L. major e caracterizados quanto aos mesmos parâmetros. Observamos que o controle sobre o número de cópias do plasmídeo é perdido, mas o nível do transcrito ectópico e sua estabilidade assemelham-no ao transcrito PGKC original
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 18.09.2008

  • How to cite
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    • ABNT

      AZEVEDO, Aline de; CRUZ, Angela Kaysel. Investigação sobre elementos envolvidos no controle de expressão gênica em Leishmania: os genes das fosfoglicerato-quinases como modelo. 2008.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2008.
    • APA

      Azevedo, A. de, & Cruz, A. K. (2008). Investigação sobre elementos envolvidos no controle de expressão gênica em Leishmania: os genes das fosfoglicerato-quinases como modelo. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Azevedo A de, Cruz AK. Investigação sobre elementos envolvidos no controle de expressão gênica em Leishmania: os genes das fosfoglicerato-quinases como modelo. 2008 ;
    • Vancouver

      Azevedo A de, Cruz AK. Investigação sobre elementos envolvidos no controle de expressão gênica em Leishmania: os genes das fosfoglicerato-quinases como modelo. 2008 ;


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