Método molecular para identificação das bactérias metabolicamente ativas de biofilmes na superfície de membranas de osmose reversa (2008)
- Authors:
- Autor USP: SCHNEIDER, RENE PETER - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: A colmatação de membranas de osmose reversa devido à formação de biofilmes microbianos, principal determinante de perda de eficiência operacional e de redução de vida útil, tem sido um importante entrave para a redução de seu custo operacional. A identidade dos organismos formadores de "biofouling" nestas membranas é desconhecida. O objetivo deste trabalho foi desenvolver, validar e aplicar método molecular para a identificação das bactérias formadoras de biofilme metabolicamente ativas na superfície de membranas de osmose reversa. O método envolve extração do rRNA 16S da camada de "biofouling", reações de RT-PCR e clonagem. A diferenciação dos clones foi realizada pela técnica de ARDRA. O método mais adequado de extração de rRNA, dentre os testados, foi realizado por meio de lise física- "Bead beater". A remoção do biofilme da membrana foi realizada por meio de trituração. Os ácidos nucléicos foram quantificados no espectrofotômetro Nanodrop®. Para a validação do método foram realizados consórcios com cDNA e rRNA de três bactérias diferentes, misturados em proporções de 1:1:1, 1:1:2 e 1:1:8. As comunidades artificiais foram empregadas para avaliar a eficiência de amostragem (detecção de todos os componentes do consórcio) e a fidedignidade na representação do consórcio (informação correta sobre a proporção dos organismos) pelos métodos de RT-PCR seguido de clonagem. Não houve considerável variação na quantidade de produto gerado na síntese da primeira fita de cDNA dasdiferentes bactérias após reação de transcriptase reversa, ao passo que após a síntese total do cDNA foram observadas variações entre os produtos gerados. ) Os clones obtidos das misturas de cDNAs de diferentes bactérias apresentaram variações inferiores a 20% em relação ao esperado, demonstrando que o método de clonagem não acarreta em grandes variações nas proporções esperadas. Em contrapartida, os clones obtidos das misturas de rRNA de diferentes bactérias apresentaram variações nas proporções em relação ao esperado chegando a serem superiores a 100%, dados que sugerem que a etapa de RT-PCR pode distorcer a proporção original dos componentes da comunidade. A aplicação do método para análise das bactérias metabolicamente ativas em biofilme de um sistema de pré-tratamento de água resultou na obtenção de 117 clones, representando 47 perfis diferentes de ARDRA. Somente poucos perfis foram recuperados em maior abundância. Os perfis dos três organismos numericamente dominantes correspondiam a 47, 10 e 6 clones. Os menos representativos totalizaram 6 clones com 2 a 5 perfis e 29 com um único perfil, sendo estes considerados de pouca relevância na análise da atividade metabólica.
- Imprenta:
- Publisher: Sociedade Brasileira de Genética
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2008
- Source:
- Título: Programa
- Conference titles: Congresso Brasileiro de Genética
-
ABNT
ALMEIDA, Roberta Novaes Amorim e BARRETO, C. C. e SCHNEIDER, René Peter. Método molecular para identificação das bactérias metabolicamente ativas de biofilmes na superfície de membranas de osmose reversa. 2008, Anais.. Ribeirão Preto: Sociedade Brasileira de Genética, 2008. . Acesso em: 10 out. 2024. -
APA
Almeida, R. N. A., Barreto, C. C., & Schneider, R. P. (2008). Método molecular para identificação das bactérias metabolicamente ativas de biofilmes na superfície de membranas de osmose reversa. In Programa. Ribeirão Preto: Sociedade Brasileira de Genética. -
NLM
Almeida RNA, Barreto CC, Schneider RP. Método molecular para identificação das bactérias metabolicamente ativas de biofilmes na superfície de membranas de osmose reversa. Programa. 2008 ;[citado 2024 out. 10 ] -
Vancouver
Almeida RNA, Barreto CC, Schneider RP. Método molecular para identificação das bactérias metabolicamente ativas de biofilmes na superfície de membranas de osmose reversa. Programa. 2008 ;[citado 2024 out. 10 ] - Determinação de microorganismos metabolicamente ativos em ambientes naturais por CTC (5-cyano-2,3-ditoluyl tetrazolium chloride)
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