Identificação de sinais celulares e fatores de transcrição que regulam a expressão do gene cspD de Caulobacter crescentus (2008)
- Authors:
- Autor USP: MARQUES, MARILIS DO VALLE - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Caulobacter crescentus é uma bactéria mesófila, gram-negativa, encontrada em amostras de água de lagos que congelam por completo no inverno. C. crescentus possui quatro genes de choque frio: cspA e cspB são induzidos em resposta ao choque frio e cspC e cspD são induzidos em fase estacionária. O objetivo deste trabalho é a identificação de sinais celulares e fatores de transcrição que regulam a expressão do gene cspD de C. crescentus. Inicialmente foi realizada a varredura de uma biblioteca de 7.500 clones mutados pela inserção do transposon Tn5. Os clones mutantes da biblioteca receberam o plasmídeo PcspD/lacZ (promotor de cspD clonado à frente do gene repórter lacZ no plasmídeo pRKlacZ290) por conjugação com E.coli S17-1. Através de avaliação utilizando X-Gal e posteriormente ensaio de atividade de ?-galactosidase, foram selecionadas 6 linhagens mutantes que apresentaram baixa atividade enzimática em comparação ao controle positivo (linhagem NA1000 de C. crescentus conjugada com o plasmídeo PcspD/lacZ).Através de seqüenciamento de DNA, foram identificados os genes interrompidos em 5 mutantes: CC0254 (proteína transportadora de membrana); CC2587 (ABC Transporter); CC2518 (proteína hipotética); CC3167 (proteína da família glicoquinase) e CC3504 (proteína da família peptidase M13). A expressão de cspD no mutante CC3167 foi avaliada em meio M2 (meio mínimo) e em M2 com carência de carbono na fase exponencial e fase estacionária mostrando um aumento de expressão emcarência de glicose. Também foi realizada uma curva de crescimento do mutante CC3167 nos meios PYE e M2 onde foi visto um crescimento bem mais lento no meio M2. A expressão de cspD de C. crescentus também foi avaliada em resposta a carência nutricional de carbono e amônia, em presença de diferentes compostos. ) Notou-se um aumento significativo em torno de 50% da indução do gene cspD nas células crescidas em meio mínimo com carência de carbono e amônia o que demonstra que carência nutricional também é um fator que altera a expressão deste gene. No ensaio de crescimento em diferentes meios a expressão de cspD aumentou expressivamente na fase estacionária em meio M2 contendo 2% peptona, o que nos leva a pensar que a expressão deste gene pode ser afetada pela a via de regulação por ppGpp. A partir disto realizamos ensaios de atividade de ?-galactosidase preliminares na presença de metil-alfa-D-glicosídeo (simulando carência de glicose) e DL-serina hidroxamato (simulando carência de aminoácidos)e foi verificado um aumento de duas vezes na expressão de cspD nas duas condições. A proteína CspD recombinante foi expressa em em E.coli e purificada para obtenção de soro anti-CspD.
- Imprenta:
- Publisher: Sociedade Brasileira de Genética
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2008
- Source:
- Título: Programa
- Conference titles: Congresso Brasileiro de Genética
-
ABNT
SILVA, C. A P. T. et al. Identificação de sinais celulares e fatores de transcrição que regulam a expressão do gene cspD de Caulobacter crescentus. 2008, Anais.. Ribeirão Preto: Sociedade Brasileira de Genética, 2008. . Acesso em: 13 out. 2024. -
APA
Silva, C. A. P. T., Balhesteros, H., Lang, E. A. S., Italiani, V. C. S., & Marques, M. do V. (2008). Identificação de sinais celulares e fatores de transcrição que regulam a expressão do gene cspD de Caulobacter crescentus. In Programa. Ribeirão Preto: Sociedade Brasileira de Genética. -
NLM
Silva CAPT, Balhesteros H, Lang EAS, Italiani VCS, Marques M do V. Identificação de sinais celulares e fatores de transcrição que regulam a expressão do gene cspD de Caulobacter crescentus. Programa. 2008 ;[citado 2024 out. 13 ] -
Vancouver
Silva CAPT, Balhesteros H, Lang EAS, Italiani VCS, Marques M do V. Identificação de sinais celulares e fatores de transcrição que regulam a expressão do gene cspD de Caulobacter crescentus. Programa. 2008 ;[citado 2024 out. 13 ] - Isolamento de mutantes deficientes na reposta a estresse osmótico em Caulobacter crescentus
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