Trabalho de evento-resumo

Papel de um regulador de transcrição da família BlaI na resposta a estresse oxidativo em Caulobacter crescentus (2008)

• Authors:
  • Braz, V. S.
  • Valença, E. Y.
  • Santos, E. S.
  • Marques, Marilis do Valle
• Autor USP: MARQUES, MARILIS DO VALLE - ICB
• Unidade: ICB
• Assunto: MICROBIOLOGIA
• Language: Português
• Abstract: O genoma da alfa proteobactéria de vida livre Caulobacter crescentus apresenta três reguladores de transcrição da família BlaI. O único mecanismo bem estudado envolvendo os reguladores de transcrição desta família é o mecanismo de resistência a antibióticos ?-lactâmicos. No sistema BlaI, a proteína de membrana BlaR1 é uma sensora do ?-lactâmico, que ao se ligar ao antibiótico é auto-clivada, liberando seu domínio citoplasmático. Sugere-se que este domínio é a protease ativa que clivaria o dímero do repressor BlaI, tornando-o incapaz de se ligar ao operador no DNA, aumentando assim os níveis de transcrição da ?-lactamase. Previamente, demonstramos que uma linhagem mutante interrompida aleatoriamente pelo transposon miniTn5lacZ em um gene que codifica um regulador de transcrição da família BlaI (CC1640) em C. crescentus mostrou alta sensibilidade a Cd2+ e Zn2+. A jusante do gene CC1640 está o gene CC1639, uma proteína hipotética que é um ortólogo de BlaR1, e através de RT-PCR foi visto que estes genes fazem parte de um mesmo transcrito. Com o objetivo de caracterizar este regulador de transcrição e verificar se ele está envolvido na expressão de outros genes, foi construído o mutante nulo SP2011, através de uma deleção em fase do gene CC1640 para evitar efeito polar sobre o gene CC1639. Através de teste de viabilidade as linhagens mutantes contendo o miniTn5lacZ e SP2011mostraram ser mais sensíveis a H2O2 do que a linhagem parental NA1000. A região promotora do operonCC1640/CC1639 foi clonada no vetor pRKlacZ290, em frente ao gene repórter lacZ. Os resultados de ensaio de atividade de ?-Galactosidase, realizados nas linhagens parental e mutante SP2011, indicaram que o promotor deste gene é induzido em fase estacionária e apresenta uma auto-regulação negativa, contudo não mostrou alteração da expressão na presença de H2O2. ) O resultado da auto-regulação negativa sugere que BlaI possa ligar na sua região promotora e assim regular a sua própria expressão. Para confirmar esta hipótese o gene CC1640 foi clonado, e a proteína His-BlaI, expressa heterologamente em E. coli, foi purificada e usada em ensaio de mobilidade em gel (gel shift). Foi identificado um retardamento da banda utilizando diferentes concentrações de proteína purificada, o que confirma que BlaI se liga na região promotora do operon CC1640/CC1639. Genes localizados próximos ao operon CC1640/CC1639 no genoma de C. crescentus, que codificam para proteínas hipotéticas e oxidoredutases, foram analisados quanto a sua regulação por BlaI. Análise por RT-PCR semi-quantitativo com três destes genes candidatos mostrou que a expressão do gene CC1638, que codifica uma oxidoredutase, não é detectada na linhagem parental, mas está presente na linhagem mutante SP2011, indicando que BlaI (CC1640) age como repressor da expressão do gene CC1638, enquanto os outros dois genes testados, CC1636 e CC1634, não apresentaram nenhuma alteração no padrão de expressão.
• Imprenta:
  • Publisher: Sociedade Brasileira de Genética
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2008
• Source:
  • Título do periódico: Programa
• Conference titles: Congresso Brasileiro de Genética

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How to cite

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• ABNT

  BRAZ, V. S.; VALENÇA, E. Y.; SANTOS, E. S.; MARQUES, Marilis do Valle. Papel de um regulador de transcrição da família BlaI na resposta a estresse oxidativo em Caulobacter crescentus. Anais.. Ribeirão Preto: Sociedade Brasileira de Genética, 2008.

• APA

  Braz, V. S., Valença, E. Y., Santos, E. S., & Marques, M. do V. (2008). Papel de um regulador de transcrição da família BlaI na resposta a estresse oxidativo em Caulobacter crescentus. In Programa. Ribeirão Preto: Sociedade Brasileira de Genética.

• NLM

  Braz VS, Valença EY, Santos ES, Marques M do V. Papel de um regulador de transcrição da família BlaI na resposta a estresse oxidativo em Caulobacter crescentus. Programa. 2008 ;

• Vancouver

  Braz VS, Valença EY, Santos ES, Marques M do V. Papel de um regulador de transcrição da família BlaI na resposta a estresse oxidativo em Caulobacter crescentus. Programa. 2008 ;

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