Coordenação das respostas celulares ao estresse genotóxico causado pelos raios-gama em linhagens de glioblastoma proficientes e mutantes para o gene TP53 (2008)
- Authors:
- Autor USP: GODOY, PAULO ROBERTO D'AURIA VIEIRA DE - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- Subjects: RADIAÇÃO IONIZANTE; DNA (REPARAÇÃO)
- Language: Português
- Abstract: As radiações ionizantes (RI) bloqueiam a proliferação e levam à morte celular pela indução de lesões no DNA, principalmente quebras de fita simples e duplas (DSBs). Essas lesões são detectadas e processadas por uma complexa rede de sinalização celular. No entanto, em glioblastomas, a heterogeneidade genética leva a uma sinalização celular alterada, diversificando as respostas à radioterapia entre tumores de diferentes pacientes. Neste estudo, foram avaliadas respostas celulares à radiação ionizante ('Co POT.60') em quatro linhagens de glioblastoma (GBM), diferenciadas principalmente pelo status do gene TP53 (mutante para as linhagens T98G e U251 e selvagem para U343 e U87). Foram avaliados parâmetros como sobrevivência clonogênica (15 dias após o tratamento) e citotoxicidade (24 h e 5 dias, kit XTT), apoptose (24, 48 e 72 h), ensaio de cometa (O, 0,5, 1, 2 e 6 h), e análise de perfis de expressão por cDNA microarrays (0,5 e 6 h) nas linhagens T98G, U343, U87 e U251. A expressão transcricional por qPCR em tempo real (6 h) e Western blot (6 h) foram avaliadas somente para T98G e U343. As doses variaram de 2 a 16 Gy de acordo com o experimento. Em 24 h após a RI, os resultados do teste de citotoxicidade (kit XTT) mostraram uma ausência de resposta, enquanto que, em 120 h (5 dias), houve uma redução significativa nas taxas de sobrevivência. As curvas de sobrevivência clonogênica indicam padrões similares para três linhagens (U343MG, T98G e U251), enquanto que a U87apresentou taxas de sobrevivência maior do que as outras linhagens até 8 Gy, sob as doses de 2, 4, 8 e 16 Gy. Foram observados diferentes padrões de indução de apoptose nas células selvagens (U343 e U87) e mutantes (T98G e U251) para TP53, com baixas taxas de apoptose nas proficientes e altos níveis de indução de apoptose nas mutantes, principalmente nas doses de 8 e 16 Gy (48 e 72 horas). O Ensaio do Cometa mostrou que todas as linhagens sofreram redução dos danos no DNA (baseado no Tail Moment), dependendo do tempo de colheita, até o reparo completo em 6 h. Os dados da qPCR mostraram que a transcrição dos genes TP53, A TM, PRKDC alternaram do estado reprimido (4 Gy) para o estado induzido (8 Gy), exceto o gene BRCA1, na linhagem T98G, induzido em 4 e 8 Gy. O ensaio Western blot mostrou uma indução ,dependente de dose para o gene TP53, na linhagem U343, enquanto que a T98G não mostrou indução, mas apresentou nível basal da proteína. A análise dos perfis de expressão gênica efetuada pelo método de cDNA microarrays gerou uma grande quantidade de dados interessantes. Primeiramente, pela aplicação do programa MEV, o agrupamento hierárquico dos resultados de expressão mostrou perfis de expressão comuns ou diferentes, dependendo do grupo de genes, para as linhagens estudadas, caracterizando as mesmas. Além disso, observou-se uma evidente distinção entre as células irradiadas e não irradiadas. A análise dos resultados gerados realizada pelo método SAM(Significance Analysis of Microarrays) mostrou que as linhagens proficientes para o gene TP53 apresentaram 62 genes significativamente modulados (5 induzidos e 57 reprimidos) no tempo de 30 min após a irradiação, enquanto que as mutantes apresentaram 21 genes (11 induzidos e 10 reprimidos) no mesmo tempo. Em 6 h, foram modulados 88 (20 induzidos e 68 reprimidos) e 59 genes (16 induzidos e 43 reprimidos), para as linhagens proficientes e mutantes, respectivamente. Várias funções foram moduladas, como diferenciação celular, adesão celular, ciclo celular, apoptose, reparo do DNA, transdução de sinal etc., sendo que muitas dessas funções foram comuns, ou exclusivas às linhagens mutantes ou proficientes, nos tempos de 30 min e 6 h. A linhagem U87 apresentou um maior grau de radiorresistência entre as linhagens. Algumas funções biológicas moduladas nessa linhagem podem estar correlacionadas à radiorresistência, tais como: modulação de atividade MAPK (30 min e 6 h), crescimento celular (30 min), resposta ao estresse (30 min e 6 h), diferenciação celular (30 minutos), ciclo celular (6 h), adesão celular (6 h). Segundo a literatura, existe uma grande complexidade inerente à coordenação dos vários processos biológicos implicados nas respostas à irradiação das células. Mas sem dúvida, as informações obtidas no presente trabalho fornecem uma contribuição importante na elucidação de tais mecanismos, ainda pouco esclarecidos, além de apontar algumas vias desinalização bloqueadas ou ativadas, em comum ou de forma diferencial para as linhagens GBM. Essas informações são relevantes na busca por alvos de intervenção terapêutica, seja por inibição farmacológica ou molecular
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2008
- Data da defesa: 18.08.2008
-
ABNT
GODOY, Paulo Roberto D'Auria Vieira de. Coordenação das respostas celulares ao estresse genotóxico causado pelos raios-gama em linhagens de glioblastoma proficientes e mutantes para o gene TP53. 2008. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2008. . Acesso em: 08 out. 2024. -
APA
Godoy, P. R. D. 'A. V. de. (2008). Coordenação das respostas celulares ao estresse genotóxico causado pelos raios-gama em linhagens de glioblastoma proficientes e mutantes para o gene TP53 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Godoy PRD'AV de. Coordenação das respostas celulares ao estresse genotóxico causado pelos raios-gama em linhagens de glioblastoma proficientes e mutantes para o gene TP53. 2008 ;[citado 2024 out. 08 ] -
Vancouver
Godoy PRD'AV de. Coordenação das respostas celulares ao estresse genotóxico causado pelos raios-gama em linhagens de glioblastoma proficientes e mutantes para o gene TP53. 2008 ;[citado 2024 out. 08 ]
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
