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Purificação parcial da proteína p83, uma proteína aparentemente nova, sistema nervoso-específica e desenvolvimento-regulada (2008)

  • Authors:
  • Autor USP: DOMBROSKI, THAÍS CAROLINE DALLABONA - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RNP
  • Subjects: PROTEÍNAS (ISOLAMENTO E PURIFICAÇÃO); SISTEMA NERVOSO; NEUROLOGIA
  • Language: Português
  • Abstract: ‘KM POT. +’ é uma lectina ligante de D(+)-manose, que foi purificada de semente de jaqueira (Artocarpus integrifoiia). Estudos realizados em nosso laboratório usando anticorpos policlonais específicos anti-’KM POT. +’, purificados por afinidade usando coluna de Sepharose-’KM POT. +’, mostraram que o cerebelo e cérebro de rato em desenvolvimento exibem imunorreatividade ‘KM POT. +’ símile marcando eventos do desenvolvimento. A proteína responsável por essa imunorreatividade foi parcialmente caracterizada a partir de cerebelo de rato em desenvolvimento, usando anticorpos anti-’KM POT. +’ como sonda (Martins et aI., 1998; Viapiano et al., 2000). Esta proteína é solúvel, não exibe propriedades de lectina convencional, possui massa molecular aparente 83 kDa e foi por conseguinte denominada p83. A proteína p83 foi detectada através de Western blot em homogeneizados de cerebelo e cérebro de rato, mas não em homogeneizados de pulmão, rim, coração, baço, figado e sangue. P83 também foi detectada no córtex cerebral e cerebelo humanos por Western blot. Mostrou-se que p83 está aparentemente associada a laminina, tau, tubulina e calmodulina, proteínas que estão envolvidas em processos de desenvolvimento neural normal e patológico, e também à heat-shock protein 90’beta’ (HSP90’beta’) (Viapiano et aI., 2001), uma importante chaperona molecular. Estas associações macromoleculares de p83, se por um lado indicam sua importância biológica, por outro dificultam sua purificação. Oobjetivo deste trabalho foi purificar a proteína p83 para obter amostras sequenciáveis e estudar a expressão de p83 em cerebelo de rato em desenvolvimento, por imunohistoquímica, utilizando o anticorpo anti-’KM POT. +’. O protocolo de purificação de p83 foi estabelecido e consistiu em homogeneização hipotônica de 150g de cérebro ou cerebelo de rato, precipitação fracionada com sulfato de amônio, cromatografia de troca aniônica em coluna de DEAE- Sepharose, cromatografia hidrofóbica em colunas de Phenyl-Sepharose e Butyl-Sepharose e, alternativamente, cromatografia em coluna de Hidroxiapatita e/ ou Gel-filtração em coluna de Sephacryl S300, para refinamento. A seguir a amostra purificada foi separada por SDS-P AGE preparativo e a banda correspondente à p83 imunoreativa foi excisada do gel e enviada para seqüenciamento. Uma amostra purificada e sequenciada na Rockefeller University resultou na similar to p53 associated parkin-like cytoplasmic protein. A análise bioinformática desta proteína mostrou a presença de domínios conservados em sua estrutura, como APC10, CPH e IBR. Paralelamente, em nosso laboratório um gene foi clonado a partir de uma biblioteca de expressão de cerebelo de rato, utilizando anti-’KM POT. +’ como sonda. O fragmento de cDNA sequenciado foi identificado como drebrina. Com imunohistoquímica, a expressão de p83 imunoreativa foi observada durante o desenvolvimento cerebelar do rato em células granulares da camada pré-migratória e emcélulas em processo de migração. Foi observado também em processos celulares direcionados à superfície pial, em células de Purkinje e em tratos de fibras na substância branca. No rato e humano adulto e idoso, p83 imunoreativa é principalmente detectada no corpo celular e varicosidades das colaterais recorrentes das células de Purkinje, nas células granulares e fibras na substância branca. Estes resultados indicam que p83 é uma proteína aparentemente nova e sua expressão é regulada durante o desenvolvimento do rato
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 02.06.2008

  • How to cite
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    • ABNT

      DOMBROSKI, Thaís Caroline Dallabona; MARTINS, Antonio Roberto. Purificação parcial da proteína p83, uma proteína aparentemente nova, sistema nervoso-específica e desenvolvimento-regulada. 2008.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2008.
    • APA

      Dombroski, T. C. D., & Martins, A. R. (2008). Purificação parcial da proteína p83, uma proteína aparentemente nova, sistema nervoso-específica e desenvolvimento-regulada. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Dombroski TCD, Martins AR. Purificação parcial da proteína p83, uma proteína aparentemente nova, sistema nervoso-específica e desenvolvimento-regulada. 2008 ;
    • Vancouver

      Dombroski TCD, Martins AR. Purificação parcial da proteína p83, uma proteína aparentemente nova, sistema nervoso-específica e desenvolvimento-regulada. 2008 ;

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