Inovações instrumentais em sistemas de eletroforese capilar com detecção eletroquímica e aplicações em análises de mono e oligossacarídeos, aminoácidos e proteínas (2008)
- Authors:
- Autor USP: BLANES, LUCAS - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QFL
- Subjects: ELETROFORESE CAPILAR DE ZONA (INSTRUMENTOS;EQUIPAMENTOS); CONDUTOMETRIA
- Language: Português
- Abstract: A presente tese é o resultado de um complexo trabalho de instrumentação em Eletroforese Capilar (CE) com detecção condutométrica sem contato (C4D) visando à análise de biomoléculas. No que diz respeito à instrumentação, dois equipamentos de CE (Hl e Bl), que possuem um sistema único de eletrólise separada (MSE), foram desenvolvidos. Hl possui apenas um capilar, e nele foi desenvolvida a maioria dos experimentos apresentados nesse trabalho. Neste equipamento, foi implementado um sistema de marcas térmicas, cuja aplicação foi demonstrada na correção de variações nos tempos de migração dos íons ´NaPOT.+´ e ´KPOT.+´ presentes em clara de ovos. Também realizamos a separação e detecção (10 ´MU´mol LPOT.-1´) de proteínas entre 12 e 66 kDa, comprovando que a detecção dessas moléculas é factível, desde que se use agentes que evitem a adsorção. Experimentos de separação e detecção de quitooligossacarídeos produzidos enzimaticamente também foram desenvolvidos em Hl. Com o uso de NaOH como eletrólito de, corrida acrescido de acetonitrila como agente modificador, verificamos a separação completa de seis quitooligossacarídeos (C 1 a C6) com limites de detecção e quantificação inferiores a 3 ´MU´mol LPOT.-1´ e 10 ´MU´mol LPOT.-1´, respectivamente. Após ensaios enzimáticos dos substratos C2 a C6 com a quitinase purificada de um besouro Tenebrio molitor (TmChi), observamos que esta cliva com baixíssima eficiência tanto C2 como C3. A mesma é capaz de clivar C4 produzindo C2 e suaação sobre C5 gera C2 e C3, sendo este o substrato de maior afinidade. C6 também é clivado por essa quitinase, gerando, contudo, C2 ou C3, o que indica que ela é uma endoquitinase. O equipamento Bl possui oito capilares e oito detectores condutométricos sem contato, possuind()!a~roaior relação sinal/ruído a (1 M4Hz e 4 ´VIND.pico.a.pico'. O equipamento possibilita a separação simultânea de até oito amostras distintas com quatro ) possíveis eletrólitos e potenciais de trabalho. Nesse equipamento, foram desenvolvidas as separações dos vinte aminoácidos proteinogênicos, usando-se duas condições distintas de separação, ambas em meio ácido. Separações em meio básico e com potenciais de separação variados também foram avaliadas. Além dos sistemas Hl e Bl, também foi desenvolvido um microchip em PDMS comum biorreator enzimático (IMER) para detecção de glicose. A detecção de peróxido formado pela ação da enzima glicose oxidase presente no IMER foi realizada por amperometria. O chip apresentou as melhores condições de separação e detecção desse açúcar usando-se eletrodo de trabalho a 0,9V, pH 8,5 e separação a 1100, V. Foi verificada uma relação linear entre as concentrações de 0,1 a 6,2 mmol´L.POT.-1´ de glicose injetada, com relação ao pico de corrente obtido. Com as condições otimizadas do chip, determinou-se a concentração de glicose em amostra de refrigerante, obtendo-se uma concentração de 216 mmol´L.POT.-1´, valor semelhante a ao obtido em literatura
- Imprenta:
- Data da defesa: 27.03.2008
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ABNT
BLANES, Lucas. Inovações instrumentais em sistemas de eletroforese capilar com detecção eletroquímica e aplicações em análises de mono e oligossacarídeos, aminoácidos e proteínas. 2008. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2008. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46133/tde-29052008-094103/. Acesso em: 09 nov. 2024. -
APA
Blanes, L. (2008). Inovações instrumentais em sistemas de eletroforese capilar com detecção eletroquímica e aplicações em análises de mono e oligossacarídeos, aminoácidos e proteínas (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46133/tde-29052008-094103/ -
NLM
Blanes L. Inovações instrumentais em sistemas de eletroforese capilar com detecção eletroquímica e aplicações em análises de mono e oligossacarídeos, aminoácidos e proteínas [Internet]. 2008 ;[citado 2024 nov. 09 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46133/tde-29052008-094103/ -
Vancouver
Blanes L. Inovações instrumentais em sistemas de eletroforese capilar com detecção eletroquímica e aplicações em análises de mono e oligossacarídeos, aminoácidos e proteínas [Internet]. 2008 ;[citado 2024 nov. 09 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46133/tde-29052008-094103/
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