Construção de vetor adenoviral para expressão de shRNA contra o gene eGFP (2007)
- Authors:
- Autor USP: MENCK, CARLOS FREDERICO MARTINS - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Diversas tecnologias vêm sendo desenvolvidas para a inibição da expressão de genes-alvos, tanto para estudo da função gênica como para uso em terapia. Dentre estas, o silenciamento gênico pós-transcricional através de pequenos RNAs interferentes (small interfering RNAs - siRNAs) tem se mostrado bastante eficiente. A interferência por RNA (RNAi) é um processo biológico desencadeado por duplas-fitas de RNA, que leva à degradação do do gene-alvo. Existem muitas maneiras de entregar o siRNA no interior da célula, uma delas é a utilização de vetores virais desenhados para a produção de shRNAs (short harpin RNAs). Estes quando processados pela maquinaria da RNAi, darão origem aos siRNAs. Uma vez escolhido o método a ser utilizado, este deve ser previamente testado para verificar se a entrega e a produção de shRNA na célula foram eficazes. Assim, objetivos deste trabalho construir um vetor adenoviral para a produção de shRNAs direcionados para a inativação do gene eGFP (enhanced-Green Fluorescent Protein) shGFP e testar sua eficiência.. Para tanto, a seqüência de um shGFP foi deduzida a partir de uma seqüência-alvo previamente descrita e oligonucleotídeos com código para este shRNA sintetizados e clonados no vetor adenoviral (pAdenoVator) para a produção do AdshGFP. Fibroblastos humanos transformados (MRC5) foram utilizados na co-transdução de AdshGFP e AdGFP, previamente produzidos no laboratório, e a análise da eficiência de inativação do gene eGFP foi averiguada emmicroscópio de fluorescência. As células co-transduzidas apresentaram níveis baixíssimos de expressão de eGFP, quando comparadas com as células controle transduzidas apenas com AdGFP. Além disso, tanto o vetor AdshGFP quanto o vetor AdGFP tiveram 100% de transdução. Deste modo, demonstrado que o vetor adenoviral construído é bastante eficiente como modo de entrega e expressão de shRNAs, podendo ser utilizado como controle positivo da transdução e da inativaçã
- Imprenta:
- Publisher: Sociedade Brasileira de Genética
- Publisher place: Águas de Lindóia
- Date published: 2007
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso Brasileiro de Genética
-
ABNT
PUJIZ, R. S. e MENCK, Carlos Frederico Martins e VASQUES, L. R. Construção de vetor adenoviral para expressão de shRNA contra o gene eGFP. 2007, Anais.. Águas de Lindóia: Sociedade Brasileira de Genética, 2007. . Acesso em: 16 abr. 2024. -
APA
Pujiz, R. S., Menck, C. F. M., & Vasques, L. R. (2007). Construção de vetor adenoviral para expressão de shRNA contra o gene eGFP. In Resumos. Águas de Lindóia: Sociedade Brasileira de Genética. -
NLM
Pujiz RS, Menck CFM, Vasques LR. Construção de vetor adenoviral para expressão de shRNA contra o gene eGFP. Resumos. 2007 ;[citado 2024 abr. 16 ] -
Vancouver
Pujiz RS, Menck CFM, Vasques LR. Construção de vetor adenoviral para expressão de shRNA contra o gene eGFP. Resumos. 2007 ;[citado 2024 abr. 16 ] - Restoring DNA repair capacity of cells from three distinct diseases by XPD gene-recombinant adenovirus
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