Detecção de proteassoma livre em humor aquoso de coelhos (2007)
- Authors:
- Autor USP: MINARÉ FILHO, ABENOR MOREIRA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: ROO
- Subjects: HUMOR AQUOSO; OLHO (FISIOPATOLOGIA); OFTALMOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Introdução: Algumas atividades fundamentais que possibilitam a vida, como a apresentação de antígenos, apoptose, reciclagem de proteínas e controle de fatores transcricionais, dependem de atividade proteolítica. O Proteassoma é o mais importante agente proteolítico dos organismos eucarióticos já estudados e é normalmente descrito como sendo intracelular. Objetivos: Determinar se o Proteassoma está presente e ativo no humor aquoso (um meio acelular com concentração protéica em torno de 500 vezes menor que o plasma) e no humor vítreo. Material e Métodos: Utilizamos coelhos da raça Nova Zelândia, de ambos os sexos, que eram anestesiados e submetidos à paracentese para aspiração do humor aquoso. Após 15 minutos, nova amostra era colhida, do mesmo olho (humor aquoso refeito, que tem concentração protéica em torno de 15 vezes maior que o humor aquoso normal).O olho contralateral era submetido à punção via pars plana, para aspiração do humor vítreo. As amostras eram então armazenadas em eppendorfs, com adição de glicerol(para preservar a atividade do Proteassoma), em gelo. Em seguida, era realizada eletroforese (SDS PAGE).com 20müg de proteínas por coluna e finalmente,Western Blotting, para identificar as subunidades alfa do proteassoma e compostos ubiquitinados. O ensaio de atividade era realizado por espectrofluorimetria, com o substrato fluorogênico Suc-Leu-Leu-Val- Tyr- AMC.O inibidor MG132 era utilizado para controle. Resultados: Identificamos as subunidades alfa doProteassoma e compostos ubiquitinados em todas as amostras. A atividade foi demonstrada e pôde ser inibida com o uso de MG132. Conclusão: O Proteassoma está presente de forma livre e ativo no humor aquoso.
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2007
- Data da defesa: 17.12.2007
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ABNT
MINARÉ FILHO, Abenor Moreira; RODRIGUES, Maria de Lourdes Veronese. Detecção de proteassoma livre em humor aquoso de coelhos. 2007.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2007. -
APA
Minaré Filho, A. M., & Rodrigues, M. de L. V. (2007). Detecção de proteassoma livre em humor aquoso de coelhos. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Minaré Filho AM, Rodrigues M de LV. Detecção de proteassoma livre em humor aquoso de coelhos. 2007 ; -
Vancouver
Minaré Filho AM, Rodrigues M de LV. Detecção de proteassoma livre em humor aquoso de coelhos. 2007 ;
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