Construção do fago recombinante D29::gfp com potencial de aplicação nos testes de sensibilidade pela concentração inibitória mínima para o Mycobacterium spp. (2007)
- Authors:
- Autor USP: CARBONE, PAULO HENRIQUE LAGE - FCF
- Unidade: FCF
- Sigla do Departamento: FBC
- Subjects: TESTES DE QUÍMICA CLÍNICA (DESENVOLVIMENTO); TUBERCULOSE (QUIMIOTERAPIA); MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS (IDENTIFICAÇÃO)
- Language: Português
- Abstract: O objetivo desse trabalho foi construir o fago recombinante D29::gfp e testar a sua utilização como um agente revelador da viabilidade bacilar na determinação da concentração inibitória mínima (CIM) aos principais fármacos administrados no tratamento da tuberculose. O fago recombinante contém o promotor hsp70 e o gene da proteína verde fluorescente (gfp) e foi construído através da restrição pela Spe I em uma região intergênica próxima a extremidade coesiva direita no genoma do fago D29. O promotor hsp70 e gfp clonados no pYL GFP foram amplificados pela PCR utilizando iniciadores com sítios para Spe I. O DNA do fago D29 digerido pela Spe I foi ligado com o fragmento hsp70-gfp empregando a T4 DNA ligase e os produtos da reação de ligação foram transformados de acordo com o protocolo de encapsulamento. A infecção do M.smegmatis com esse fago recombinante induziu a expressão da proteína verde fluorescente (GFP). Para avaliar o uso do fago recombinante em teste de sensibilidade aos fármacos anti-tuberculose, 100 isolados clínicos foram testados quanto ao perfil de sensibilidade a isoniazida (H), rifampicina (R), estreptomicina (S) e etambutol (E), utilizando o método das proporções em Lowenstein-Jensen (L-J), técnica em microplaca com a resazurina (REMA) e técnica em microplaca com D29::gfp. Os resultados do REMA demonstraram que 30 isolados clínicos foram sensíveis à H e 58 (66 `POR CENTO`) isolados clínicos foram resistentes, dentre os quais a CIM foi 1`MICROGRAMAS`/mL ou maior para 41 (71 `POR CENTO`). A CIM da R para 49 (56 `POR CENTO`) ) dos isolados clínicos resistentes foi de 0,5 `MICROGRAMAS`/mL para 17 (35 `POR CENTO`). A CIM da S para 33 (37 `POR CENTO`) dos isolados clínicos resistentes foi de 2 `MICROGRAMAS`/mL para 13 (40 `POR CENTO`) e CIM do E para 34 (39 `POR CENTO`) dos isolados clínicos resistentes foi de 16 `MICROGRAMAS`/mL ou maior para 19 (56 `POR CENTO`). A caracterização molecular pela PCR lS6110 identificou 88 isolados clínicos como M.tuberculosis e pelo PRA hsp65, sete isolados clínicos foram M. kansasii, quatro foram M.abscessus e um M.szulgai. Após empregar a fago recombinante como um agente indicador da viabilidade bacilar para testar a atividade dos fármacos anti-tuberculose conclui-se que a expressão da proteína verde fluorescente foi inespecífica e não reprodutiva, não justificando o seu uso para determinar a ClM para os principais fármacos administrados no tratamento da tuberculose
- Imprenta:
- Data da defesa: 29.06.2007
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ABNT
CARBONE, Paulo Henrique Lage. Construção do fago recombinante D29::gfp com potencial de aplicação nos testes de sensibilidade pela concentração inibitória mínima para o Mycobacterium spp. 2007. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2007. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-21072017-160650/. Acesso em: 30 set. 2024. -
APA
Carbone, P. H. L. (2007). Construção do fago recombinante D29::gfp com potencial de aplicação nos testes de sensibilidade pela concentração inibitória mínima para o Mycobacterium spp. (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-21072017-160650/ -
NLM
Carbone PHL. Construção do fago recombinante D29::gfp com potencial de aplicação nos testes de sensibilidade pela concentração inibitória mínima para o Mycobacterium spp. [Internet]. 2007 ;[citado 2024 set. 30 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-21072017-160650/ -
Vancouver
Carbone PHL. Construção do fago recombinante D29::gfp com potencial de aplicação nos testes de sensibilidade pela concentração inibitória mínima para o Mycobacterium spp. [Internet]. 2007 ;[citado 2024 set. 30 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-21072017-160650/
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