Expressão e purificação da septina Cdc12 de paracoccidioides brasiliensis em escherichia coli (2007)
- Authors:
- Autor USP: REIS, THAILA FERNANDA DOS - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: PARACOCCIDIOIDES BRASILIENSIS; ANTICORPOS (PRODUÇÃO)
- Language: Português
- Abstract: Em fungos e animais, as septinas costituem uma família de proteínas conservadas que formam complexos hetero-oligoméricos e que se associam em filamentos na periferia celular. Essas proteínas são caracterizadas pela presença de um domínio de ligação à GTP na região central e um domínio coiled-coil na extremidade Ç- terminal. No fungo leveduriforme Sacharomyces cerevisiae, as septinas desempenhan1 função em diversos processos como citocinese, esporulação, ciclo celular e morfogênese. Atualmente, pouco é conhecido sobre as septinas e suas funções em fungos patogênicos, particularmente Paracoccidioides brasiliensis. Sendo assim, nosso principal objetivo foi identificar, clonar e expressar uma ORF que. codifica para septina em P. brasiliensis, purificar a proteína e produzir anticorpos contra a mesma. Inicialmente, pesquisamos um banco de dados de EST de P. rasiliensis e identificamos um clone de cDNA com alta homologia a genes que codificam para septina CDC12 em Aspergillusfumigatus (91% de identidade) e S. cerevisiae (59% de identidade). Após amplificação por PCR das OREs (sem a seqüência que codifica para o domínio coiled-coil), o fragmento foiclonado em vetorde expressão pQE (Qiagen) que adiciona uma cauda de 6 histidinas na porção N-terminal da proteina expressa, o que possibilita a purificação por afinidade da proteína recombinante. Cepas de E, coli M15 foram, então, transformadas com ,o vetor recombinante e a expressão da proteína foi induzidapela adição de 1 mM de IPTG em culturas líquidas. As células foram lisadas por sonicação e aseptina expressa foi purificada em resina de Ni2+(Qiagen). A proteína purificada foi injetada em múltiplos sítios no dorso de coelhos para a produção de anticorpos. O soro imune foi testado por western immunoblotting contra a proteína PbCdc12 imobilizada em membrana de nitrocelulose. Os resultados obtidos revelaram a produção de anticorpos policlonais contra a septina PbCdc 12 e que esses anticorpos possuem reação cruzada com septinas de outros fungos como C. albicans cerevisiae. A imunolocalização da proteína PbCdc12 em células leveduriformes de P. brasiliensis mostrou uma localização na base do broto, ou seja, nas regiões de limite entre a célula mãe e o broto. O anticorpo policlonal produzido contra PbCdc 12 será útil para o estudo do comportamento e organização da septina PbCdc 12 durante o ciclo celular, assim como anãlise do padrão de expressão e localização da septina não apenas em P. brasiliensis como também em outros fungos relacionados, nos ajudando a entender um pouco mais da biologia celular desses fungos
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2007
- Data da defesa: 26.10.2007
-
ABNT
REIS, Thaila Fernanda dos. Expressão e purificação da septina Cdc12 de paracoccidioides brasiliensis em escherichia coli. 2007. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2007. . Acesso em: 27 dez. 2025. -
APA
Reis, T. F. dos. (2007). Expressão e purificação da septina Cdc12 de paracoccidioides brasiliensis em escherichia coli (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Reis TF dos. Expressão e purificação da septina Cdc12 de paracoccidioides brasiliensis em escherichia coli. 2007 ;[citado 2025 dez. 27 ] -
Vancouver
Reis TF dos. Expressão e purificação da septina Cdc12 de paracoccidioides brasiliensis em escherichia coli. 2007 ;[citado 2025 dez. 27 ] - Identificação, clonagem e análise da expressão de proteínas-CPI de Paracoccidioides brasiliensis
- Heterogeneity in the transcriptional response of the human pathogen Aspergillus fumigatus to the antifungal agent caspofungin
- Green and chemical silver nanoparticles and pomegranate formulations to heal infected wounds in diabetic rats
- The Aspergillus fumigatus Mismatch repair MSH2 homolog is important for virulence and azole resistance
- Identification and immunogenic potential of glycosylphosphatidylinositol-anchored proteins in Paracoccidioides brasiliensis
- In silico identification of glycosylphosphatidylinositol-anchored proteins in Paracoccidioides spp
- GPCR-mediated glucose sensing system regulates light-dependent fungal development and mycotoxin production
- Secondary metabolites produced during Aspergillus fumigatus and Pseudomonas aeruginosa biofilm formation
- Aspergillus fumigatus acetate utilization impacts virulence traits and pathogenicity
- Screening of chemical libraries for new antifungal drugs against Aspergillus fumigatus reveals sphingolipids are involved in the mechanism of action of miltefosine
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
