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Estudo da cinética de RNAS virais durante a replicação do vírus sincicial respiratório humano (2007)

  • Authors:
  • Autor USP: CRIADO, MIRIÃ FERREIRA - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBP
  • Subjects: VÍRUS DE RNA (PATOGENICIDADE); INFECÇÕES RESPIRATÓRIAS (IMUNOLOGIA)
  • Language: Português
  • Abstract: O vírus respiratório sincicial humano (HRSV) é o agente viral causador de infecções agudas do trato respiratório inferior de maior impacto em saúde pública infantil, causando grande morbidade e mortalidade em crianças de todo mundo. Apesar da sua grande importância em saúde pública, os mecanismos patogênicos de HRSV são pouco conhecidos. Um componente importante na regulação da patogenicidade de HRSV é a intensidade da replicação viral, refletida por possíveis marcadores de eficiência replicativa, tais como níveis de RNA(+), quer sejam antigenomas, quer sejam mRNAs de proteínas chave no ciclo viral. Nesse estudo foi desenvolvido um ensaio de RT-PCR em tempo real para detectar a cinética de acúmulo de diferentes RNAs virais durante o ciclo replicativo de HRSV. No entanto, observamos a presença de cDNAs formados na RT mesmo sem a adição de primers exógenos (‘cDNA POT. primer (-)’), gerando resultados falso-positivos. Para solucionar este problema, desenvolvemos um ensaio de RT-PCR em tempo real específico, utilizando na etapa da RT primers biotinilados que permitem purificar o cDNA no qual se incorporam, por meio de separação magnética. Com isso conseguimos desenvolver método de detecção específico e diferencial para as diversas espécies de RNAs virais (genoma, antigenoma e mRNAs) produzidos durante a replicação do vírus em ciclo replicativo único em células A549. Dentro da célula, RNAs genômicos e antigenômicos foram encontrados em concentrações crescentes, compredominância do RNA genômico durante todo o ciclo. A maior quantidade de RNAs foi detectada às 24 horas (aproximadamente 5 vezes mais genoma do que anti-genoma), seguindo-se de redução nas 24h seguintes. Os níveis de mRNAs dos genes N, F e G de HRSV obtidos estão de acordo com o modelo mais aceito de replicação de paramyxovírus, segundo o qual a expressão se dá em um gradiente de transcrição no qual os genes proximais ao promotor são transcritos mais freqüentemente do que os genes mais distais. Portanto, apesar das perdas de cDNA inerente ao processo de purificação, o método usado trouxe avanço na investigação da cinética de acúmulo dos RNAs de HRSV, por não ignorar a inespecificidade devida à existência de ‘cDNA POT. primer(-)’
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 30.11.2007

  • How to cite
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    • ABNT

      CRIADO, Miriã Ferreira; ARRUDA NETO, Eurico de. Estudo da cinética de RNAS virais durante a replicação do vírus sincicial respiratório humano. 2007.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2007.
    • APA

      Criado, M. F., & Arruda Neto, E. de. (2007). Estudo da cinética de RNAS virais durante a replicação do vírus sincicial respiratório humano. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Criado MF, Arruda Neto E de. Estudo da cinética de RNAS virais durante a replicação do vírus sincicial respiratório humano. 2007 ;
    • Vancouver

      Criado MF, Arruda Neto E de. Estudo da cinética de RNAS virais durante a replicação do vírus sincicial respiratório humano. 2007 ;


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