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Análise dos receptores `P2X IND.2` e `P2X IND.4` durante a diferenciação neuronal (2007)

  • Authors:
  • Autor USP: MAJUMDER, PAROMITA - IQ
  • Unidade: IQ
  • Sigla do Departamento: QBQ
  • Subjects: DIFERENCIAÇÃO CELULAR; RECEPTORES CELULARES (ANÁLISE); BIOFÍSICA; CARCINOMA (ESTUDO)
  • Language: Português
  • Abstract: Durante o desenvolvimento do sistema nervoso, as oscilações da concentração de cálcio intracelular livre resultam na proliferação celular, migração e diferenciação neuronal. Nesta tese foram investigadas a participação dos receptores ionotrópicos purinérgicos dos tipos `P2X IND.2` e `P2X IND.4` seletivos ao influxo de cálcio durante a diferenciação neuronal in vitro das células de carcinoma embrionário murino P19. Identificamos o padrão diferencial de expressão de receptores purinérgicos nas células indiferenciadas e neurônios P19. O receptor `P2X IND.4` é expresso durante toda a diferenciação neuronal e o receptor `P2X IND.2` é detectado na fase tardia da diferenciação em neurônios. Através de ensaios farmacológicos, foi possível identificar a participação dos receptores metabotrópicos P2Y e do receptor `P2X IND.4` na formação dos corpos embriônicos, na proliferação celular e ou na determinação do fenótipo de progenitor neural. Durante a maturação neuronal os receptores `P2X IND.2` e `P2Y IND.1` participam da determinação do fenótipo neuronal glutamatérgico NMDA e os receptores `P2X IND.2` e `P2Y IND.2` no fenótipo neuronal colinérgico. A ausência de inibidores específicos e seletivos aos receptores purinérgicos levou-nos a empregar a técnica SELEX (Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment) a fim de identificar inibidores seletivos aos receptores `P2X IND.2` e `P2X IND.4`. A técnica envolve a utilização da biblioteca combinatória randômicade RNA 2'-F pirimidina modificadas resistentes a nucIeases. Após 9 cicIos de seleção in vitro de SELEX (cicIo 9-`P2X IND.4`), as sequências ) selecionadas mostraram-se seletivas a ligação somente ao receptor `P2X IND.4` e não aos receptores `P2X IND.2` ou `P2X IND.7` através de ensaios de ligação radioligante-receptor. Por patch clamping na configuração whole cell recording identificou-se que além de seletividade ao receptor, que a aplicação do RNA cicIo 9-`P2X IND.4` promoveu inibição da corrente ativada pelo ATP somente nos receptores `P2X IND.4` e não em `P2X IND.2` em células 1321N1 astrocitoma transfectadas. A incubação do RNA cicIo 9-`P2X IND.4` na concentração de 200 nM com as células no estágio indiferenciado inibiu a formação dos corpos embriônicos. Já utilização de 25 nM, resultou em mudanças morfológicas nas células diferenciadas. Estes dados corroboram com os dados farmacológicos que identificaram a participação do receptor `P2X IND.4` na diferenciação precoce. Após 11 cicIos `P2X IND.2` de seleção, identificou-se sequências com especificidade de ligação aos receptores `P2X IND.2`. Aptâmeros, moléculas de RNA com sequência identificada e com alta afinidade ao alvo da seleção, foram isolados de ambas as bibliotecas, cicIo 9 `P2X IND.4` e cicIo 11 `P2X IND.2`. A co-aplicação destes aptâmeros e ATP em ensaios de whole-cell recording resultou na inibição de 30 a 80 `POR CENTO` da corrente ativada pelo ATP nos receptores `P2X IND.2` ou `P2X IND.4`. Estes testes emcélulas PC12 de rato, que expressa os receptores endógenos, resultou em inibição da corrente ativada pelo ATP de modo semelhante. Além de termos desenvolvido aptâmeros como ferramentas para elucidar as funções dos receptores ) `P2X IND.2` e `P2X IND.4` durante o desenvolvimento, diferenciação, em processos fisiológicos e patológicos, estas moléculas resistentes a nucleases são as primeiras identificadas capazes de reconhecer, discernir e inibir dois subtipos de receptores purinérgicos sendo promissores para utilização terapêutica
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 14.02.2007
  • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      MAJUMDER, Paromita; ULRICH, Henning. Análise dos receptores `P2X IND.2` e `P2X IND.4` durante a diferenciação neuronal. 2007.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2007. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-05102007-145008/ >.
    • APA

      Majumder, P., & Ulrich, H. (2007). Análise dos receptores `P2X IND.2` e `P2X IND.4` durante a diferenciação neuronal. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-05102007-145008/
    • NLM

      Majumder P, Ulrich H. Análise dos receptores `P2X IND.2` e `P2X IND.4` durante a diferenciação neuronal [Internet]. 2007 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-05102007-145008/
    • Vancouver

      Majumder P, Ulrich H. Análise dos receptores `P2X IND.2` e `P2X IND.4` durante a diferenciação neuronal [Internet]. 2007 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-05102007-145008/

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