Efeito da calmodulina sobre a atividade da isoforma 1 do trocador Na+/H+ (NHE1) (2007)
- Authors:
- Autor USP: SOUZA, MARIA OLIVEIRA DE - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: FISIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivo: A isoforma 1 do trocador Na+/H+ humano (hNHE1) apresenta 2 sítios de interação com a calmodulina ( sítios A e B). O cálcio citosólico liga-se à calmodulina para formar um complexo ativo que pode modular a atividade do hNHE1. O objetivo desse trabalho é investigar como o complexo cálcio-calmodulina modula a atividade do hNHE1 expresso em células PS120. Métodos e Resultados: Em nossos estudos, utilizamos o DNA do hNHE1 selvagem (wild type) previamente clonado no vetor de expressão pcDNA3.1. Inicialmente, por reações de PCR, realizamos mutações no sítio A do hNHE1, substituindo os aminoácidos lisina (641) e argininas (643, 645 e 647) por ácido glutâmico. No sítio B, substituímos os aminoácidos ácido glutâmico (677) e glutaminas (671,675 e 678) por argininas. Em seguida, clonamos os mutantes de hNHE1 no vetor de expressão pcDNA3.1 e após o sequenciamento dos ácidos nucléicos, expressamos os recombinantes (hNHE1/pcDNA 3.1) selvagem ou mutantes nas células PS120 ( linhagem derivada de fibroblasto de hamster). Os clones positivos foram selecionados por carga ácida e western blot. A atividade do hNHE1 foi avaliada por medidas de pH intracelular (pHi), utilizando microscopia de fluorescência e a sonda intracelular fluorescente BCECF/AM. Os resultados preliminares indicam que em células PS120 transfectadas com hNHE1 selvagem, a velocidade de extrusão celular de H+ (dpHi/dt) após o pulso ácido com NH4Cl, quando as células são expostas à solução controle é[0.194± 0.018 (14) unidades de pH/minuto]. ) Este parâmetro é discretamente aumentado com ionomicina - ionófero de cálcio (1µM) [0.232± 0.008 (8) unidade de pH/minuto]. Em células PS120 transfectadas com hNHE1 cujo sitio A foi alterado, a dpHi/dt na situação controle é significativamente reduzida [ 0.098±0.011 (15) unidades de pH/minuto] em relação ao controle de hNHE1 selvagem. Entretanto, este valor é revertido com ionomicina [0.197±0.023 (8) unidades de pH/minuto]. Conclusões: O sítio A do NHE1 é fundamental para modular o trocador via complexo cálcio-calmodulina. Na condição em que o sítio A está modificado pelas mutações, o sítio B intacto e na presença de ionomicina, ao interagir com o complexo cálcio-calmodulina, permite que o hNHE1 recupere o pHi somente até o nível basal. Atualmente, estamos realizando os estudos funcionais com o mutante do sítio B.
- Imprenta:
- Publisher: Federação de Sociedades de Biologia Experimental
- Publisher place: Águas de Lindóia
- Date published: 2007
- Source:
- Título: Programa e Resumos
- Conference titles: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental - FESBE
-
ABNT
EGUTI, D. M. N. e OLIVEIRA-SOUZA, Maria. Efeito da calmodulina sobre a atividade da isoforma 1 do trocador Na+/H+ (NHE1). 2007, Anais.. Águas de Lindóia: Federação de Sociedades de Biologia Experimental, 2007. . Acesso em: 25 abr. 2025. -
APA
Eguti, D. M. N., & Oliveira-Souza, M. (2007). Efeito da calmodulina sobre a atividade da isoforma 1 do trocador Na+/H+ (NHE1). In Programa e Resumos. Águas de Lindóia: Federação de Sociedades de Biologia Experimental. -
NLM
Eguti DMN, Oliveira-Souza M. Efeito da calmodulina sobre a atividade da isoforma 1 do trocador Na+/H+ (NHE1). Programa e Resumos. 2007 ;[citado 2025 abr. 25 ] -
Vancouver
Eguti DMN, Oliveira-Souza M. Efeito da calmodulina sobre a atividade da isoforma 1 do trocador Na+/H+ (NHE1). Programa e Resumos. 2007 ;[citado 2025 abr. 25 ] - Protein kinase C isoforms in the kidney
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