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Caracterização funcional de diferentes componentes das vias metabólicas de resposta ao dano ao DNA do no fungo filamentoso aspergillus nidulans (2007)

  • Authors:
  • Autor USP: MALAVAZI, IRAN - FCFRP
  • Unidade: FCFRP
  • Sigla do Departamento: S/D
  • Subjects: FUNGOS (GENÉTICA); BIOLOGIA MOLECULAR
  • Language: Português
  • Abstract: O complexo Mre11 (Mre11/Rad50/Nbs1) é uma componente chave da resposta celular ao dano ao DNA em humanos e recentes observações sugerem que estas .. proteínas são em parte responsáveis pela interface ente o sensoreamento do dano ao DNA, seu reparo e as funções das proteínas envolvidas nos pontos de checagem do ciclo celular. Em Aspergillus nidulans, a partir de um "screening" para o Isolamento de letais sintéticos na ,ausência de dineína, o gene sldl’POT. RAD50’ foi cionado ' como um desses letais sintéticos através da complementação do fenótipo de deficiência de conidiação do mutante. Foi identificada uma transversão G-C na .posição 2509 (Ala-692-Pro) no mutante sldl1444 a qual está presente na região de dobradiça da proteína. Essa mutação causa sensibilidade a vários agentes mutagênicos. Uma linhagem mutante sldl’POT. RAD50’::pyrG foi construída a qual apresentou também vários defeitos na reposta celular ao dano ao DNA incluindo sensibilidade a várias drogas mutagênicas, defeito no ponto de checagem de replicação do DNA e na viabilidade dos ascosporos. Além disso, o gene sldl’POT. RAD50’ interage geneticamente com bimE’POT. APC1’ para o controle do "spindle pole checkpoint" durante a segregação cromossômica sugerindo um novo papel para o complexo Mre11. Em atuação paralela com o complexo Mre11, duas proteínas quinases ditas apicais, ATM e ATR coordenam a transdução do sinal do dano ao DNA para proteínas efetoras do reparo. A proteína ATM está mutada na síndromede instabilidade cromossômica herdada Ataxia Telangiectasia. Para a caracterização do homologo de ATM em A. nidulans AtmA, uma linhagem mutante ‘delta’atmA’POT. ATM’ foi isolada. Esse mutante apresentou falha na reposta ao dano ao DNA, como seus homólogos em vários outros organismos mostrando defeitos no ponto de checagem intrafase S e G2/M, além de sensibilidade a camptothecin e bleomicina. Ainda, o extrato protéico bruto desse mutante não foi ) capaz de fosforilar o homologo de NBS1 em A. nidulans, I ScaA. Além das conhecidas funções de ATM na resposta ao dano ao DNA, foi verificado que o mutante ‘delta’atmA’POT. ATM’ apresentou uma acelerada cinética de divisão nuclear e severos defeitos no estabelecimento e manutenção do eixo de crescimento polarizado, evidenciando uma função ainda não descrita para ATM no crescimento polar. Provavelmente, AtmA regula a função e/ou localização de proteínas chaves para a formação do eixo de polarização. Diante disso, para investigar as vias metabólicas que são controladas por esse gene, o perfil transcricional do mutante ‘delta’atmA’POT. ATM’, em comparação com a linhagem selvagem foi verificado em diferentes condições de crescimento. Os resultados indicaram um importante papel da via das pentoses fosfato na proliferação celular monitorada pela AtmA. Além disso, foram identificados vários genes com a expressão do mRNA diminuída envolvidos no crescimento polarizado, na síntese de ácido fosfatídico e de ergosterol e no tráficointracelular, secreção e transporte vesicular. Buscando identificar genes que participam da resposta celular ao dano ao DNA causado pela droga anti topoisomerase I, camptothecin, foram utilizados filtros de macroarray de A. nidulans contendo 2787 genes deste organismo para monitorar a expressão gênica da linhagem selvagem e do mutante uvsB’POT. ATR’, num experimento de indução com CPT por 30, 60 e 120 minutos. Os resultados revelaram um total de 1512 e 1700 genes modulados na linhagem selvagem e uvsB’POT. ATR’ respectivamente, em pelo menos um ponto experimental. Seis desses genes que apresentaram aumento da expressão de mRNA na linhagem selvagem e diminuição da linhagem uvB’POT. ATR’ foram caracterizados: fhdA (que codifica para uma proteina com domínio "fork-head associated"), tprA (uma proteína hipotética que apresenta o domínio "tetratrico peptide repeat"), mshA ) (um homólogo MutS6 envolvido em "mismatch repair"), phbA (um homólogo da prohibitina), uvsC’POT. RAD51’ e cshA (homólogo da proteína CSB envolvida no reparo por excisão de nucleotídeos e ligada a Síndrome de Cockayne). A indução transcricional desses genes na presença de CPT requer a função de ‘delta’uvsB’POT. ATR’. Estes genes foram deletados e surpreendentemente apenas uvsC’POT. RAD51’ apresentou sensibilidade a CPT, enquanto os outros mostraram sensibilidade a outros agentes que causam dano ao DNA e estresse oxidativo. Além disso, com exceção de uvsC’POT. RAD51’, a deleção desses genesleva a supressão parcial da sensibilidade a menadiona e paraquat do mutante ‘delta’uvsB’POT. ATR’. Esses resultados indicaram um comportamento heterogêneo de sensibilidade durante o crescimento na presença de agentes que causam dano direto ou indireto ao DNA, evidenciando que o perfil transcricional não é determinante para predizer a função de um gene na proteção da célula a determinada droga que causa dano ao DNA
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 25.07.2007
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    • ABNT

      MALAVAZI, Iran; GOLDMAN, Gustavo Henrique. Caracterização funcional de diferentes componentes das vias metabólicas de resposta ao dano ao DNA do no fungo filamentoso aspergillus nidulans. 2007.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2007. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-01042009-101041/ >.
    • APA

      Malavazi, I., & Goldman, G. H. (2007). Caracterização funcional de diferentes componentes das vias metabólicas de resposta ao dano ao DNA do no fungo filamentoso aspergillus nidulans. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-01042009-101041/
    • NLM

      Malavazi I, Goldman GH. Caracterização funcional de diferentes componentes das vias metabólicas de resposta ao dano ao DNA do no fungo filamentoso aspergillus nidulans [Internet]. 2007 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-01042009-101041/
    • Vancouver

      Malavazi I, Goldman GH. Caracterização funcional de diferentes componentes das vias metabólicas de resposta ao dano ao DNA do no fungo filamentoso aspergillus nidulans [Internet]. 2007 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-01042009-101041/


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