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Busca e identificação de genes regulados pelo antígeno MT do vírus polioma na transformação maligna de células Balb-3T3 (2007)

  • Authors:
  • Autor USP: RODRIGUES, LEONARDO DE OLIVEIRA - IQ
  • Unidade: IQ
  • Sigla do Departamento: QBQ
  • Subjects: REGULAÇÃO NEOPLÁSICA DA EXPRESSÃO GÊNICA; REGULAÇÃO GÊNICA; VÍRUS ONCOGÊNICOS
  • Language: Português
  • Abstract: O Vírus Polioma (Py), induz a formação de múltiplos tumores em camundongos, e causa transformação maligna em cultura, levando à menor dependência de soro e ancoragem para crescimento. Dentre as proteínas codificadas pelo vírus polioma, o antígeno MT (Middle T), isoladamente, é capaz de transformar linhagens celulares imortalizadas e gerar tumores quando injetadas em camundongos, sendo que este caráter transformante está relacionado à sua capacidade de se ligar e modular a atividade de diversas proteínas, muitas das quais relacionadas com o controle do ciclo celular. Para melhor compreender os mecanismos moleculares da transformação maligna mediada por MT e do controle do ciclo celular, o objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar novas vias de transdução de sinal e novos genes regulados por MT. Para a busca de genes regulados pela atividade de MT, comparou se o perfil da expressão gênica da linhagem que expressa MT (MTWT) ---com o da linhagem controle (PL) através de três metodologias: membranas de nylon-comerciais (Atlas Mouse Cancer 1.2 - Clontech), bibliotecas subtrativas de cDNA construídas através da técnica de RDA (Análise de Diferença Representacional) e lâminas comercias de microarrays (CodeLink Bioarrays - GE Healthcare). As três metodologias permitiram a identificação de cerca de 1.200 genes-candidatos a serem regulados por MT, dos quais 84 genes foram selecionados para terem sua expressão diferencial analisada por Real-Time PCR.Para identificar possíveis vias de transdução de sinal relacionadas à regulação dos genes analisados utilizou-se, como template, além do cDNA proveniente das linhagens PL e MTWT, cDNAs de linhagens que expressam a proteína MT mutada nas tirosinas 315, 322, 250 e 315/322. Após confirmação por Real-Time PCR, dois genes foram selecionados para analise funcional: Dlk1 (Delta Like-1 homolog) que, apesar de não ter relação direta com o controle ) do ciclo celular, está ligado à formação de alguns tumores, e MN1 (Meningioma 1), um gene pouco caracterizado que já foi relacionado à formação de leucemias mielóides e meningiomas. Para caracterizar o papel de MN1 na linhagem PL, foram geradas linhagens PL que superexpressam RNAi de MN1. A análise dos parâmetros de crescimento, em substrato sólido e semi-sólido, da linhagem PL parental e PL expressando o RNAi de MN1 não apresentou alterações estatisticamente significativas. Para o estudo do efeito de Dlk1 na transformação mediada por MT, foram geradas linhagens MTWT que superexpressam Dlk1, o que levou a um aumento estatisticamente significativo na taxa de divisão celular, quando comparada com a linhagem controle (vetor vazio), indicando um possível papel de Dlk1 no sinal desencadeado por MT e no controle do ciclo celular. Visando identificar novas vias de regulação entre os genes analisados, os níveis de expressão gênica dos demais genes foram avaliados por Real-Time PCR e analisados através de correlação de Pearson,aplicada a cada par de genes. Após a análise, foram identificadas 64 possíveis vias de regulação, sendo que 13 destas foram descritas pela primeira vez no presente trabalho e as demais, por já estarem descritas na literatura, permitiram validar o modelo estudado
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 10.04.2007
  • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      RODRIGUES, Leonardo de Oliveira; SOGAYAR, Mari Cleide. Busca e identificação de genes regulados pelo antígeno MT do vírus polioma na transformação maligna de células Balb-3T3. 2007.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2007. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-24072008-112813/ >.
    • APA

      Rodrigues, L. de O., & Sogayar, M. C. (2007). Busca e identificação de genes regulados pelo antígeno MT do vírus polioma na transformação maligna de células Balb-3T3. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-24072008-112813/
    • NLM

      Rodrigues L de O, Sogayar MC. Busca e identificação de genes regulados pelo antígeno MT do vírus polioma na transformação maligna de células Balb-3T3 [Internet]. 2007 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-24072008-112813/
    • Vancouver

      Rodrigues L de O, Sogayar MC. Busca e identificação de genes regulados pelo antígeno MT do vírus polioma na transformação maligna de células Balb-3T3 [Internet]. 2007 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-24072008-112813/

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