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Tese

Padronização e formulação do custo da PCR-RFLP para o diagnóstico de Leishmaniose Tegumentar em papel de filtro (2007)

  • Authors:
  • Autor USP: FREITAS, STELLA FELIPPE DE - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RCM
  • Subjects: LEISHMANIOSE CUTÂNEA; DIAGNÓSTICO
  • Language: Português
  • Abstract: A leishmaniose tegumentar Americana (LTA), nas formas cutânea ou mucosa, é endêmica no Brasil. Nos últimos anos, o Ministério da Saúde registrou média de 35.000 casos novos de LTA em praticamente todos os estados do país, sendo sua crescente a cada ano. Na região nordeste do estado de São Paulo, incluindo Ribeirão Preto, a LTA é autóctone. Na tentativa de um diagnóstico precoce e seguro da doença associaram-se ao exame clínico- epidemiológico exames subsidiários, como a Polymerase Chain Reaction (PCR) e PCR- Restriction Fragment Lenght Polymorphism (PCR-RFLP), que permitem a identificação da espécie de leishmania presente na amostra. Identificamos em nosso laboratório, por PCR, as espécies L. (v:) braziliensis e L (L.) amazonensis em amostras de pele ou de mucosa de pacientes com L T A. Dessa forma, os objetivos principais deste estudo foram: (1) padronizar a técnica de PCR-RFLP para a identificação da espécie de leishmania em amostras de pele ou de mucosa, coletadas em papel de filtro na forma de imprint, e (2) calcular o custo individual deste exame laboratorial. A população de estudo contou com 67 amostras de pacientes atendidos no HC- FMRP-USP, 28 amostras de pacientes atendidos no Hospital Universitário de Brasília-D.F. e 2 amostras da UNIFESP, totalizando 97 amostras. Das 65 amostras na forma de imprint de pacientes .com diagnóstico clínico de L T A atendidos no HC-FMRP/USP, no Hospital Universitário de Brasília-D.F. e na UNIFESP, 54 (83%) amostrasforam positivas na PCR. A partir do resultado da identificação por PCR-RFLP, com as enzimas Hae III e Bsr I, das 54 amostras forma de imprint pudemos demonstrar que 39 (72,2%) foram de L. (V:) braziliensis; quatro (7,4%) foram identificadas como L. (L.) amazonensis. Das 97 amostras na forma de imprint 32 foram coletadas de pacientes com diagnóstico ou suspeita clínica de outras doenças de pele clinicamente semelhantes à LTA, atendidos no HC-FMRP/USP, foram coletadas nas formas de imprint e biópsia. Destes pacientes, 18 apresentaram PCR negativa para leishmaniose e 14 amostras cujos diagnóstico clínicos foram: Bazin, hanseníase, paracoccidioidomicose, ectima, úlcera indefinida, farmacodermia e histoplasmose, apresentaram PCR-RFLP positiva todas identificadas como L. (V) braziliensis. Ressalta-se a facilidade no envio e conservação de amostras na forma de imprint, destacando sua utilidade em pesquisas de campo e localidades distantes de um centro especializado. Para o cálculo do custo da PCR-RFLP como método diagnóstico para LTA realizou-se pesquisa de preços (em moeda corrente) de equipamentos, materiais de consumo e materiais permanentes. Ainda devem-se levar em consideração os custos diretos e indiretos, fixos e variáveis, e gastos com mão-de-obra, que influenciam diretamente o custo final do procedimento laboratorial. Quanto ao custo do exame pôde-se demonstrar que existe a possibilidade de que um laboratório de rotina de médioporte, equipado com materiais, instalações e equipamentos básicos, possa realizar o referido teste molecular, ficando este calculado em U$ 22,97. Este valor de exame desde a eluição da amostra na forma de imprint em papel de filtro em água a 90°C para a obtenção do DNA, até a identificação após a PCR-RFLP com o uso das duas endonucleases: Hae III e Bsr I. O tempo médio de realização e conclusão da identificação do agente etiológico ficou em tomo de dois dias considerando-se oito horas diárias de trabalho de mão-de-obra especializada. Finalmente, demonstrou-se a viabilidade da realização de um teste molecular na rotina laboratorial, sendo este de grande valia na rápida e específica identificação da espécie de leishmania envolvida nesta zooparasitose de importância epidemiológica
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 31.05.2007
    • How to cite
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    • ABNT

      FREITAS, Stella Felippe de. Padronização e formulação do custo da PCR-RFLP para o diagnóstico de Leishmaniose Tegumentar em papel de filtro. 2007. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2007. . Acesso em: 01 abr. 2026.

    • APA

      Freitas, S. F. de. (2007). Padronização e formulação do custo da PCR-RFLP para o diagnóstico de Leishmaniose Tegumentar em papel de filtro (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

    • NLM

      Freitas SF de. Padronização e formulação do custo da PCR-RFLP para o diagnóstico de Leishmaniose Tegumentar em papel de filtro. 2007 ;[citado 2026 abr. 01 ]

    • Vancouver

      Freitas SF de. Padronização e formulação do custo da PCR-RFLP para o diagnóstico de Leishmaniose Tegumentar em papel de filtro. 2007 ;[citado 2026 abr. 01 ]

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