Aplicação da proteína verde fluorescente, GFPuv, como indicador bilógico na validação da autoclavação de soluções parenterais e da esterilização por óxido de etileno de itens termolábeis: comparação com esporos da Bacillus subtilis (2006)
- Authors:
- Autor USP: ISHII, MARINA - FCF
- Unidade: FCF
- Sigla do Departamento: FBT
- Subjects: INDICADORES E REAGENTES (AVALIAÇÃO); PROTEÍNAS (APLICAÇÕES INDUSTRIAIS); MICROBIOLOGIA APLICADA
- Language: Português
- Abstract: A Proteína Verde Fluorescente recombinante, GFPuv, é um sistema marcador atrativo pois, sua presença pode ser visualizada através da intensidade de tluorescência emitida, sem o uso de substratos ou meios complexos. Sendo uma molécula estável à presença de substâncias orgânicas, temperaturas acima de 70 'GRAUS CENTÍGRADOS' e ampla faixa de pH, é um potencial Indicador Biológico (IB) para diversas aplicações. A estabilidade térmica da GFPuv, foi avaliada pela medida da perda de intensidade de fluorescência, expressa em valores D (min), tempo de exposição necessário para redução de 90 'POR CENTO' da intensidade de fluorescência inicial da GFPuv. GFPuv (3,5-9,0 'MICROGRAMAS'/mL), expressa por E. coli e isolada por extração de Partição em Três Fases (TPP) e purificação por Cromatografia de Interação Hidrofóbica (HIC), foi diluída nas soluções parenterais preparadas em tampão (10 mM cada: Tris-EDTA, pH 8; Fosfato, pH 6 e 7, e Acetato, pH 5) e em água para injeção, WFI; pH 'IGUAL' 6,70 'MAIS OU MENOS' O,40), e expostas a temperaturas de 25 'GRAUS CENTÍGRADOS' e ao intervalo entre 80 'GRAUS CENTÍGRADOS' e 100 'GRAUS CENTÍGRADOS'. A 95 'GRAUS CENTÍGRADOS', os valores D para a GFPuv em soluções de 1,5 'POR CENTO' a 50 'POR CENTO' de glicose variaram de: (i) 1,63 ('MAIS OU MENOS' 0,23) min em acetato pH 5; (ii) 2,64 'MAIS OU MENOS' 0,26 min em WFI; (iii) 2,50 'MAIS OU MENOS' 0,18 min em fosfato pH 6; (iv) 3,24 'MAIS OU MENOS' 0,28 min em fosfato pH 7 e, (v) 2,89 'MAIS OU MENOS'0,44 min em Tris-EDTA pH 8. Cloreto de sódio associado aos tampões proporcionou influência positiva na estabilidade da GFPuv, sendo que em soluções de Tris-EDTA, a adição de 15-20 'POR CENTO' de NaCl dobrou a estabilidade térmica da GFPuv (valores D de 65,79 min e 18,12 min a 80 'GRAUS CENTÍGRADOS' e 85 'GRAUS CENTÍGRADOS') em relação a solução ) sem cloreto de sódio. Nos processos de esterilização por óxido de etileno (45 'GRAUS CENTÍGRADOS'-60 'GRAUS CENTÍGRADOS'), a GFPuv pode ser utilizada como IB para monitorar a distribuição de gás dentro da câmara, pois, apresentou variação na concentração remanescente de até 80 'POR CENTO', após processamento, estabelecendo áreas distintas dentro da câmara. No tratamento em autoclave, a GFPuv em solução apresentou resistência térmica em solução de fosfato pH 7,0 (valor F 'IGUAL' 2,53 min ('MAIS OU MENOS' 0,12)). Quando expressa por esporos de Bacillus subtilis, a intensidade de fluorescência emitida por esporos sobreviventes se manteve. A estabilidade térmica da GFPuv atestou sua potencialidade como indicador biológico fluorescente da garantia da eficácia de tratamento de soluções e materiais expostos ao calor
- Imprenta:
- Data da defesa: 04.10.2006
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ABNT
ISHII, Marina. Aplicação da proteína verde fluorescente, GFPuv, como indicador bilógico na validação da autoclavação de soluções parenterais e da esterilização por óxido de etileno de itens termolábeis: comparação com esporos da Bacillus subtilis. 2006. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2006. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9135/tde-23082017-115802/. Acesso em: 28 dez. 2025. -
APA
Ishii, M. (2006). Aplicação da proteína verde fluorescente, GFPuv, como indicador bilógico na validação da autoclavação de soluções parenterais e da esterilização por óxido de etileno de itens termolábeis: comparação com esporos da Bacillus subtilis (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9135/tde-23082017-115802/ -
NLM
Ishii M. Aplicação da proteína verde fluorescente, GFPuv, como indicador bilógico na validação da autoclavação de soluções parenterais e da esterilização por óxido de etileno de itens termolábeis: comparação com esporos da Bacillus subtilis [Internet]. 2006 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9135/tde-23082017-115802/ -
Vancouver
Ishii M. Aplicação da proteína verde fluorescente, GFPuv, como indicador bilógico na validação da autoclavação de soluções parenterais e da esterilização por óxido de etileno de itens termolábeis: comparação com esporos da Bacillus subtilis [Internet]. 2006 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9135/tde-23082017-115802/ - Isolamento e identificação de bactérias presentes em meio residual do cultivo de micro-organismo fotossintetizante
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