Bioanalítica de Alicyclobacillus acidoterrestris: Detecção em frutas cítricas, isolamento microbiológico e classificação filogenética por técnicas biomleculares e eletroforese em microchips (2007)
- Authors:
- Autor USP: HUACCA, MARIBEL ELIZABETH FUNES - IQSC
- Unidade: IQSC
- Subjects: SUCOS DE FRUTAS; LARANJA; BACTÉRIAS; CONTAMINAÇÃO
- Language: Português
- Abstract: Neste trabalho desenvolvemos métodos analíticos e moleculares para a detecção, isolamento e classificação filogenética de Alicyclobacillus spp. a partir de sucos de laranja e frutos ácidos, pelas técnicas: RT-PCR, nested RT-PCR, RAPD, seqüenciamento do 16S rRNA e análise por métodos eletroforéticos. A sensibilidade na detecção dos A. acidoterrestris foi melhorada por meio de reações de nested RT-PCR, utilizando primers internos (amplicon de 191 bp) que foram desenhados a partir do primeiro amplicom de 294 bp. O limite de detecção foi estudado com as reações RT-PCR e nested RT-PCR, sendo capazes de detectar concentrações de 0,1 UFC m'L POT.-1' para culturas puras e 2 UFC m'L POT.-1' em sucos de laranja artificialmente inoculados. A inibição de esporos de A. acidoterrestris também foi estudada para monitorar a diminuição da viabilidade com tratamento térmico e Sapindus saponaria (200 mg 'L POT.-1'), utilizando RT-PCR e nested RT-PCR. Com o tratamento térmico de '99 GRAUS'C por 1 h o grau de inibição dos esporos foi de 96,3%. Enquanto que, com a fração purificada de S. saponaria (200 mg 'L POT.-1') incubada à '45 GRAUS'C por 2 dias foi de 93,6%, mas com incubação de '99 GRAUS' C por 1 h foi de 98,7%, na mesma concentração de saponina.) Todas as análises de quantificação de produtos de RT-PCR e nested RT-PCR foram analisadas por meio de eletroforese em gel de agarose e eletroforese capilar em microchip no Bioanalyzer 2100 (Agilent), com os kits DNA500 e DNA 1000 LabChip®, obtendo-se maior sensibilidade nos microchips. A classificação molecular de dezenove cepas, isoladas a partir de diferentes sucos e frutos ácidos, foram estudadas utilizando RAPD-PCR e eletroforese capilar em microchips. Utilizando cinco primers aleatórios nas reações de RAPD, foi possível estudar os polimorfismos analisados nos microchips. Segundo as análises eletroforéticas, as cepas de suco concentrado e diluído de laranja (1, 2, 6) suco concentrado de limão (lim) e suco de laranja in natura (T2, T3), apresentaram similaridades genéticas com a A. acidoterrestris. O estudo de análise filogenética baseada na comparação de seqüências de DNA da região variável do gene 16S rRNA de Alicyclobacillus acidoterrestris, foi utilizado para identificar e agrupar onze cepas isoladas de superfícies e sucos de frutos ácidos. Na árvore filogenética gerada pelo método neighbor joining e bootstrap 1000 , as cepas analisadas mostraram similaridades de 99% entre todas elas, observando-se uma maior similaridade do controle A. acidoterretris (C2) com a cepa isolada de suco concentrado de limão (lim), e uma boa discriminação entre controles das espécies A. acidocaldarius, A. cicloheptanicus, A. sendaiensis e Sulfobacillus acidophilus
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2007
- Data da defesa: 18.04.2007
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ABNT
HUACCA, Maribel Elizabeth Funes. Bioanalítica de Alicyclobacillus acidoterrestris: Detecção em frutas cítricas, isolamento microbiológico e classificação filogenética por técnicas biomleculares e eletroforese em microchips. 2007. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2007. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75132/tde-29082007-143045/. Acesso em: 14 set. 2024. -
APA
Huacca, M. E. F. (2007). Bioanalítica de Alicyclobacillus acidoterrestris: Detecção em frutas cítricas, isolamento microbiológico e classificação filogenética por técnicas biomleculares e eletroforese em microchips (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75132/tde-29082007-143045/ -
NLM
Huacca MEF. Bioanalítica de Alicyclobacillus acidoterrestris: Detecção em frutas cítricas, isolamento microbiológico e classificação filogenética por técnicas biomleculares e eletroforese em microchips [Internet]. 2007 ;[citado 2024 set. 14 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75132/tde-29082007-143045/ -
Vancouver
Huacca MEF. Bioanalítica de Alicyclobacillus acidoterrestris: Detecção em frutas cítricas, isolamento microbiológico e classificação filogenética por técnicas biomleculares e eletroforese em microchips [Internet]. 2007 ;[citado 2024 set. 14 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75132/tde-29082007-143045/
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