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Detecção precoce de fibrossarcoma experimental baseada em perfis de expressão gênica do sistema imune (2006)

  • Authors:
  • Autor USP: MARQUES, MARCIA MARIA CHIQUITELLI - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RGE
  • Subjects: FIBROSSARCOMA; EXPRESSÃO GÊNICA; SISTEMA IMUNE
  • Language: Português
  • Abstract: '10 POT. 5' células tumorais. Também analisamos as subpopulações celulares sanguíneas e expressão gênica das células mononucleares do sangue circulante de camundongos com inflamação e daqueles com infecção bacteriana, para avaliarmos a especificidade da resposta transcricional do sistema imune. O agrupamento hierárquico usando dados com significância estatística (valores obtidos com o programa SAM), permitiu a separação das diferentes amostras de maneira não supervisionada. Estes resultados mostraram que a tecnologia dos cDNA microarrays, incluindo os programas de bioinformática dedicados, foi sensível o bastante para traçarmos assinaturas de expressãogênica do sistema imune, características de situações pátológicas, dentre as quais a presença de células tumorais in vivo e, cujo sistema-modelo, nos dá suporte para aplicar este método na detecção precoce do câncerNosso objetivo foi avaliar o perfil de expressão gênica em larga escala do sistema imune em resposta a presença de células tumorais in vivo. Para isto, desenvolvemos um sistema-modelo experimental no qual fibroblastos Balb-3T3 transfectados com o oncogene Ha-ras (linhagem B61), foram injetados por via subcutânea em camundongos Balb-c imunocompetentes ('10 POT. 6' células por animal). A injeção destas células foi seguida do aparecimento de fibrossarcoma no local, cujo crescimento foi estudado por meio de curva de crescimento do tumor (tempo em dias versus peso úmido do tumor). Para testar nossa idéia, amostras de RNA total foram extraídas primeiramente do timo de camundongos injetados com as células B61 (ou dos controles) durante o crescimento tumoral. O perfil de expressão gênica (assinaturas de hibridação) foi avaliado por meio da tecnologia dos cDNA microarrays em náilon, cujos arrays contiveram 1536 seqüências de cDNA de timo murino da biblioteca IMAGE. Neste caso as sondas (cDNA de timo) foram marcadas com o isótopo radioativo 'ANTIPOT. 33 P'. Os dados foram analisados com auxílio de programas de bioinformática dedicados como SAM (significance analysis ofmicroarrays) para evidenciarmos. os genes diferenciais com base estatística e cluster & tree-view para traçarmos as árvores (dendrogramas) de agrupamento hierárquico. Logo após três dias da injeção de '10 POT. 6' células B61, pudemos observar resposta de expressão gênica diferencial no timo de camundongosinjetados em relação aos controles, o que continuou ao longo do crescimento do tumor. Conseguimos demonstrar que o timo é responsivo, em termos de expressão gênica, a um estímulo antigênico tumoral num local distante no corpo. Tais achados nos conduziram a considerar que o método estudado poderia ser útil na detecção da presença de quantidades diminutas de células tumorais in vivo, mesmo antes do surgimento de um tumor milimétrico. Para avaliarmos esta possibilidade, variamos o número de células tumorais B61 injetadas ('10 POT. 3' e '10 POT. 5' células por animal) e extraímos RNA total de linfócitos do sangue circulante. Aumentamos o número de seqüências avaliadas para 4.500 e utilizamos microarays em lâminas de vidro e as sondas de cDNA das células mono nucleares do sangue circulante foram marcadas com fluorocromos Cy3 ou CyS. Além disso, utilizamos citometria de fluxo para estudar as eventuais variações de subpopulações celulares, tais como linfócitos 'CD3 POT. +', 'CD4 POT. +' e 'CD8 POT. +', linfócitos B 'CD19 POT. +' e células natural kille (NK) no sangue dos animais. As análises mostraram que não houve variação significativa (p<0,005) no número destas células em resposta à injeção de células tumorais, nas quantidades estudadas. Entretanto, o método de análise por cDNA microarrays, se mostrou sensível o bastante para detectarmos genes diferencialmente expressos nas células mononucleares do sangue circulante após a injeção de
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 15.12.2006

  • How to cite
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    • ABNT

      MARQUES, Márcia Maria Chiquitelli; PASSOS JÚNIOR, Geraldo Aleixo Silva. Detecção precoce de fibrossarcoma experimental baseada em perfis de expressão gênica do sistema imune. 2006.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2006.
    • APA

      Marques, M. M. C., & Passos Júnior, G. A. S. (2006). Detecção precoce de fibrossarcoma experimental baseada em perfis de expressão gênica do sistema imune. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Marques MMC, Passos Júnior GAS. Detecção precoce de fibrossarcoma experimental baseada em perfis de expressão gênica do sistema imune. 2006 ;
    • Vancouver

      Marques MMC, Passos Júnior GAS. Detecção precoce de fibrossarcoma experimental baseada em perfis de expressão gênica do sistema imune. 2006 ;

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