Estudos de fosfatases ácidas alcalinas produzidas pelo fungo Rhizopus microsporus var. Rhizopodiformis em cultivos submersos e substrato sólido (2006)
- Authors:
- Autor USP: BARBOSA JÚNIOR, ALTINO - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Subjects: FUNGOS (ANÁLISE QUÍMICA); MUCORALES
- Language: Português
- Abstract: Fosfatases são enzimas presentes em organismos eucariotos e procariotos e que hidrolisam ésteres e anidrídos do ácido fosfórico. Essas enzimas são classificadas em: i) fosfatase alcalina, ii) fosfatases ácidas de alta massa molecular, iii) fosfatases ácidas de baixa massa molecular, iv) fosfatases ácidas purpuras e v) proteíno-fosfatases. Fitase é uma fosfatase ácida que converte o fitato em mioinositol e ácido fosfórico. Adição desta enzima em rações animais resulta numa melhor digestibilidade, reduzindo custos e protegendo o meio ambiente. O objetivo deste trabalho foi a produção, purificação e a caracterização de fitases e de ácidas e alcalinas fosfatases a partir de Rhizopus microsporus var. rhizopodiformis, o qual foi isolado de solo brasileiro, em nosso laboratório. O fungo produziu altos níveis destas enzimas, além de amilases e xilanases. Condições ótimas de produção de fosfatases em fermentação estado sólido (FSS) e em fermentação submersa (FSbm) foram determinadas. As atividades fosfatases foram quantificadas usando o substrato p-NPP em tampão tris-'H''CL' 100 mM pH 8,0 (forma alcalina) e ácido succínico 100 mM pH 5,0 (forma ácida), e ácido fítico em tampão ácido succínico 100 mM pH 5,0, para fitases. A atividade enzimática foi expressa em 'mü'mol/min/mL, e o crescimento em mg proteínas totais ou mg de ergosterol. Comparando-se a fermentação Iíquida (Fsbm) e a fermentação substrata sólido (FSS), os maiores níveis fosfatásicos intra eextracelulares foram produzidos após 24-48 horas de crescimento, usando farelo de trigo ou farelo de soja, ou a mistura dessas duas fontes juntas, com água (1:1 p/v), com 70% umidade relativa, a 40°C. Os resultados sugerem que as condições ótimas do ensaio foram em pH 8,0 para a forma alcalina ou pH 5,0 para as formas ácidas e fitase; com temperatura ótima de 60°C e de 80°C, respectivamente. As enzimas apresentaram alta termoestabilidade e foram ativadas pelos íons 'MN POT. ++' e 'MG POT. ++'. As fosfatases alcalinas intra e extracelulares e a fosfatase ácida extracellular foram purificadas usando cromatografia de DEAE-Cellulose, seguida por cromatografia Concanavalina A-sepharose. A fosfatase ácida intracelular foi purificada usando a coluna de afinidade Fosfonato de Diazobenzil-L-histidina. Suas massas moleculares foram, aproximadamente, 105 kDa (ácida), 120 kDa (alcalina) em coluna de filtração Sephacryl S-250; e 52,5 kDa e 57,5 kDa em SDS-PAGE, respectivamente. Aparentemente, as fosfatases ácida e alcalina possuem estruturas homodiméricas. Os parâmetros cinéticos estimados foram: 'V IND. max' de 2,06 U/mg prot. e 'K IND. m' 0,362 mM (fitase FSS) e 'V IND. max' de 0,163 U/mg prot. e Km 0,057 mM (fitase FSbm); 'V IND. max' 0.06 U/mg prot. e Km 0.004 mM (ácida intra) e 'V IND. max' 0,338 U/mg prot. e Km 0,009 mM (ácida extra); 'V IND. max' 5,893 U/mg prot. e Km 0,277 mM (alcalina intra) e 'V IND. max' 4,843 U/mg prot. e Km 0,217 mM(alcalina extra). As fosfatases produzidas por Rhizopus microsporus var. rhizopodiformis foram promissoras em aplicações industriais e biotecnológicas, considerando suas temperaturas ótimas, termoestabilidades e facilidade de produção. Além do mais, as fosfatases ácidas foram dotadas com atividade fitase e por possuir uma ótima afinidade por mais de um substrato
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2006
- Data da defesa: 12.12.2006
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ABNT
BARBOSA JÚNIOR, Altino. Estudos de fosfatases ácidas alcalinas produzidas pelo fungo Rhizopus microsporus var. Rhizopodiformis em cultivos submersos e substrato sólido. 2006. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2006. . Acesso em: 02 out. 2024. -
APA
Barbosa Júnior, A. (2006). Estudos de fosfatases ácidas alcalinas produzidas pelo fungo Rhizopus microsporus var. Rhizopodiformis em cultivos submersos e substrato sólido (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Barbosa Júnior A. Estudos de fosfatases ácidas alcalinas produzidas pelo fungo Rhizopus microsporus var. Rhizopodiformis em cultivos submersos e substrato sólido. 2006 ;[citado 2024 out. 02 ] -
Vancouver
Barbosa Júnior A. Estudos de fosfatases ácidas alcalinas produzidas pelo fungo Rhizopus microsporus var. Rhizopodiformis em cultivos submersos e substrato sólido. 2006 ;[citado 2024 out. 02 ]
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