Isolamento de mitocôndrias de monócitos humanos para estudo de proteoma subcelular durante a diferenciação e maturação de células dendríticas (2006)
- Authors:
- Autor USP: CATALAN, ALANA MARIA CERQUEIRA DE - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: FRACIONAMENTO CELULAR; MITOCÔNDRIAS; MONÓCITOS; BIOLOGIA CELULAR
- Language: Português
- Abstract: O Interesse em estudar monócitos vem aumentando nos últimos anos devido à suautilização para a obtenção in vitro de células dendríticas (DCs). As DCs possuem um papel central na iniciação da imunidade inata e, devido à capacidade de estimular células T virgens (naive) são consideradas ferramentas promissoras para imunoterapia, no desenvolvimento de estratégias de vacina para prevenção e tratamento de câncer, infecções e rejeição de aloenxerto. Ao iniciar um projeto de proteoma, a primeira exigência é a obtenção da amostra em quantidade e com alta pureza. Porém a obtenção de monócitos combinando baixo custo, quantidade, pureza e simplicidade não existe; por isso a preocupação de utilizar um melhor método de obtenção de monócitos. Foram avaliados quatro métodos de obtenção de monócitos: seleção imunomagnética, aderência celular, centrifugação com gradiente de Percoll e de Op tiprep. Dentre os métodos avaliados, a seleção imunomagnética e a aderência celular (na presença de 5% de soro fetal bovino) foram os que demonstraram melhores resultados em termos de pureza (71 e 75%, respectivamente), porém a seleção imunomagnética é um método de alto custo. Atualmente, a centrifugação diferencial é o método mais comum de separação e isolamento de organelas. Para a obtenção de mitocôndrias de monócitos, foram avaliados três diferentes protocolos de centrifugação diferencial. O protocolo que demonstrou melhores resultados foi o que utilizou soluções de baixa osmolaridade, enquantoos demais métodos não foram suficientes para lisar os monócitos. Após a centrifugação diferencial, foi realizado um gradiente descontínuo de Percoll com 40%, 25% e 15% obtendo-se duas bandas distintas, sendo a banda mais densa a mais homogênea em mitocôndrias, conforme caracterização por microscopia eletrônica de transmissão e ensaios enzimáticos
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2006
- Data da defesa: 25.09.2006
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ABNT
CATALÁN, Alana Maria Cerqueira de. Isolamento de mitocôndrias de monócitos humanos para estudo de proteoma subcelular durante a diferenciação e maturação de células dendríticas. 2006. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2006. . Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Catalán, A. M. C. de. (2006). Isolamento de mitocôndrias de monócitos humanos para estudo de proteoma subcelular durante a diferenciação e maturação de células dendríticas (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Catalán AMC de. Isolamento de mitocôndrias de monócitos humanos para estudo de proteoma subcelular durante a diferenciação e maturação de células dendríticas. 2006 ;[citado 2024 abr. 24 ] -
Vancouver
Catalán AMC de. Isolamento de mitocôndrias de monócitos humanos para estudo de proteoma subcelular durante a diferenciação e maturação de células dendríticas. 2006 ;[citado 2024 abr. 24 ]
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