Alterações celulares e moleculares observadas em resposta ao quimioterápico temozolomida em linhagem astrocítrica (U343 MG-a) transfectada com o gene CDKN2A ('p 16 POT. ink4a') (2006)
- Authors:
- Autor USP: BAHIA, MARCELO DE OLIVEIRA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- Subjects: NEOPLASIAS; CITOGENÉTICA MOLECULAR; GENÉTICA MÉDICA
- Language: Português
- Abstract: A quimioterapia, junto com a radioterapia, são os tratamentos adjuvantes mais comuns para o tratamento de pacientes com gliomas, havendo, portanto, um grande interesse na investigação da influência desses agentes em várias classes de genes e de como esta relação pode contribuir para a iniciação e progressão dos gliomas. Atualmente, os microarranjos de DNA têm sido largamente utilizados para estudos de expressão gênica em grande escala. Assim sendo, objetivamos com o presente estudo, analisar os perfis de expressão gênica, induzidos pelo quimioterápico temozolomida (TMZ), em uma linhagem celular de astrocitoma, U343 MG-a (U343), transfectada com um sistema de regulação transcricional do gene CDKN2A ('p16 POT. ink4a') controlado por tetraciclina, que permite a análise sob condições do gene ativado ou reprimido. Além disto, outros parâmetros, tais como: citotoxicidade, sobrevivência celular, cinética do ciclo celular e indução de apoptose também foram avaliados. A linhagem transfectada mostrou uma elevada resistência ao tratamento com TMZ independentemente da expressão do gene p16, com níveis de sobrevivência clonogênica se mantendo em torno de 49% (com p16 não-expresso) e 85% (com p16 expresso) na maior concentração testada (320 µM). No entanto, o tratamento com concentrações variando de 20 a 320 µM induziu uma redução significativa na capacidade reprodutiva das linhagens U343 e clone 88 (linhagens-controle). A indução de apoptose não foi verificada em nenhumadas concentrações e tempos de coleta avaliados em nenhuma das linhagens. A TMZ ainda induziu na linhagem U343 um significativo bloqueio nas fases S do ciclo celular já nas primeiras 24 h pós-tratamento em todas as concentrações testadas, efeito não observado na linhagem transfectada no estado p16 induzido. A análise de expressão gênica diferencial por micro-arranjos de cDNA em resposta à ativação de CDKN1A (p16) mostrou a inibição de diversos genes ligados à cascata de sinalização WNT (FZD6, RYK, CTNNB1 e WNT10), envolvida na transcrição de muitos genes que induzem a proliferação celular, além da repressão de genes com atividades pró-apoptóticas (BCL2L, GZMB, PDCD10 e SEMA3A). Além disso, vários genes relacionados com alterações no citoesqueleto também foram diferencialmente expressos, o que está de acordo com as alterações morfológicas observadas nas células após a indução de p16. Adicionalmente, a análise de expressão gênica em resposta ao quimioterápico TMZ em células com o gene p16 ativado mostrou a repressão de genes, direta ou indiretamente relacionados com a proliferação celular, no tempo de 24 h (EIGF41, CDCA5, PTOV1 e SHC1) e 48 h (CDC40, CCNG1 e CTNNB1) pós-tratamento. Genes de resposta ao dano (H2AX) foram reprimidos em 24 h pós-tratamento, enquanto genes inibidores da proliferação celular (ING1 e IGFBP4) foram induzidos em 48 h. De forma global, a expressão diferencial de múltiplos genes, juntamente com os outrosparâmetros avaliados, evidenciam que o bloqueio em G1 imposto por p16 permanece mesmo após o tratamento com a TMZ, impedindo seu efeito citotóxico, conseqüentemente tornando as células refratárias à droga. Tais informações apresentam importante implicação terapêutica. Múltiplas vias de sinalização celular e molecular podem desencadear o processo de tumorigênese, bem como direcionar os mecanismos de respostas das células tumorais aos agentes anticâncer. Em conseqüência, os eventos mutacionais ocorridos no desenvolvimento das neoplasias são fatores determinantes das respostas a terapias, além do background genético dos pacientes. O presente estudo sobre as vias de sinalização celular e molecular em linhagens de glioma fornece importantes informações e implicações direcionadas ao desenvolvimento e aprimoramento de terapias para os pacientes com gliomas
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2006
- Data da defesa: 22.09.2006
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ABNT
BAHIA, Marcelo de Oliveira. Alterações celulares e moleculares observadas em resposta ao quimioterápico temozolomida em linhagem astrocítrica (U343 MG-a) transfectada com o gene CDKN2A ('p 16 POT. ink4a'). 2006. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2006. . Acesso em: 08 out. 2024. -
APA
Bahia, M. de O. (2006). Alterações celulares e moleculares observadas em resposta ao quimioterápico temozolomida em linhagem astrocítrica (U343 MG-a) transfectada com o gene CDKN2A ('p 16 POT. ink4a') (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Bahia M de O. Alterações celulares e moleculares observadas em resposta ao quimioterápico temozolomida em linhagem astrocítrica (U343 MG-a) transfectada com o gene CDKN2A ('p 16 POT. ink4a'). 2006 ;[citado 2024 out. 08 ] -
Vancouver
Bahia M de O. Alterações celulares e moleculares observadas em resposta ao quimioterápico temozolomida em linhagem astrocítrica (U343 MG-a) transfectada com o gene CDKN2A ('p 16 POT. ink4a'). 2006 ;[citado 2024 out. 08 ]
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