Caracterização de um cálcio ATPase PMR1 de aspergillus fumigatus (2006)
- Authors:
- Autor USP: SORIANI, FREDERICO MARIANETTI - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: S/D
- Subjects: BIOLOGIA MOLECULAR; BIOQUÍMICA MICROBIANA
- Language: Português
- Abstract: Os conhecimentos sobre a regulação dos níveis de cálcio e manganês no Aspergillus fumigatus são bastante limitados, sendo que a homeostase destes íons pode ser diretamente controlada pela ação de ATPases específicas, dentre elas as cálcio ATPases da subfamília PMR1. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi a expressão, caracterização e validação como alvo quimioterapêutico do gene Afpmr1 de A. fumigatus. Inicialmente, foi realizada a complementação funcional, de uma cepa de S. cerevisiae nocaute para a PMR1, em meios de cultura suplementados com EGTA ou manganês, revertendo o fenótipo da cepa nocute. Além disto, após expressão do gene Afpmr1, foi verificada uma reversão na intensa distribuição de quitina na parede celular da cepa nocaute. Paralelamente, para a RNAi, um fragmento do gene Afpmr1 apresentando baixa identidade com outros genes de cálcio ATPases de diferentes espécies foi clonado em vetor de expressão em A. fumigatus (pALB1). Após indução da expressão, a construção de RNA dupla fita para RNAi silenciou tanto o gene alb1 isoladamente (done controle), quanto o duplo silenciamento com o gene de interesse Afpmr1, conferindo à ambas construções coloração branca às colônias. Uma vez confirmado o silenciamento gênico, por técnicas de RT-PCR quantitativo, os clones selecionados foram utilizados em ensaios de fagocitose e killing de macrófagos. O clone com o gene Afpmr1 silenciado apresentou diminuição na porcentagem de fagocitose, no númeromédio de conídios fagocitados e na eficiência de eliminação destes conídios quando comparados com seus controles. Estes resultados mostram que o gene Afpmr1 pode ser expresso funcionalmente em sistemas heterólogos e seu silenciamento, em A. fumigatus, influencia processos celulares que podem estar relacionados à manutenção da estrutura e composição da parede celular, além de desencadear alterações na fagocitose e killing de macrófagos
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2006
- Data da defesa: 05.09.2006
-
ABNT
SORIANI, Frederico Marianetti. Caracterização de um cálcio ATPase PMR1 de aspergillus fumigatus. 2006. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2006. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-02102008-163023/. Acesso em: 18 abr. 2024. -
APA
Soriani, F. M. (2006). Caracterização de um cálcio ATPase PMR1 de aspergillus fumigatus (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-02102008-163023/ -
NLM
Soriani FM. Caracterização de um cálcio ATPase PMR1 de aspergillus fumigatus [Internet]. 2006 ;[citado 2024 abr. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-02102008-163023/ -
Vancouver
Soriani FM. Caracterização de um cálcio ATPase PMR1 de aspergillus fumigatus [Internet]. 2006 ;[citado 2024 abr. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-02102008-163023/
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