Estudo das bases moleculares da especificidade pelo substrato de uma beta-glicosidade (AF052729) de Spodoptera frugiperda (2006)
- Authors:
- Autor USP: ROZENFELD, JULIO HENRIQUE KRAVCUKS - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: BIOQUÍMICA ANIMAL; ENZIMAS GLICOLÍTICAS; DIGESTÃO ANIMAL (ESTUDO); BIOLOGIA MOLECULAR; MUTAGÊNESE
- Language: Português
- Abstract: A `beta`-glicosidase digestiva (Mr 50.000) de Spodoptera frugiperda (Sf`beta`gli50) possui em seu sítio -ativo resíduos de aminoácido que interagem de forma não covalente com o substrato. Essas interações não-covalentes garantem a especificidade da enzima em relação a seus substratos. Esse trabalho visa estudar o papel desses aminoácidos e suas interações com o substrato na especificidade da Sf`beta`gli50. Para isso, um modelo de previsão de especificidade baseado nas energias de interação entre diferentes resíduos de aminoácidos das posições 451 e 39 da Sf`beta`gli50 e as hidroxilas 4 e 6 do glicone do substrato foi elaborado e testado através da produção e caracterização de três duplos-mutantes (`S IND.451``N IND.39`, `S IND.451``E IND.39` e `A IND.451``E IND.39`) da Sf`beta`gli50. O modelo mostrou-se apropriado qualitativamente para previsão do comportamento da especificidade frente a glucosídeos e galactosídeos, mas totalmente inadequado para previsões de preferência frente a fucosídeos e galactosídeos. Estas conclusões indicaram que pressupostos iniciais do modelo, como independência das interações com o substrato e conservação estrutural do sítio ativo nos mutantes, estavam errados. Analisou-se também a contribuição de outros dois resíduos do subsítio do glicone para a especificidade da Sf`beta`gli50: H142 e N186, cujas energias de interação ainda não haviam sido determinadas. Experimentos de mutação sítio-dirigida foram realizados para introduzir resíduos deAlanina nas posições 142 e 186. Os mutantes H142A e N186A foram expressos em bactéria e em seguida parcialmente purificados. O mutante N186A apresentou baixa atividade catalítica, o que limitou sua caracterização. Por outro lado, a determinação de parâmetros cinéticos (`V IND.máx e `V IND.máx/Km`) mostrou que, em contraste com a Sf`beta`gli50 selvagem, o mutante H142A é menos específico, principalmente no que diz respeito a fucosídeos
- Imprenta:
- Data da defesa: 24.04.2006
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ABNT
ROZENFELD, Julio Henrique Kravcuks. Estudo das bases moleculares da especificidade pelo substrato de uma beta-glicosidade (AF052729) de Spodoptera frugiperda. 2006. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2006. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-19092006-163823/. Acesso em: 08 abr. 2026. -
APA
Rozenfeld, J. H. K. (2006). Estudo das bases moleculares da especificidade pelo substrato de uma beta-glicosidade (AF052729) de Spodoptera frugiperda (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-19092006-163823/ -
NLM
Rozenfeld JHK. Estudo das bases moleculares da especificidade pelo substrato de uma beta-glicosidade (AF052729) de Spodoptera frugiperda [Internet]. 2006 ;[citado 2026 abr. 08 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-19092006-163823/ -
Vancouver
Rozenfeld JHK. Estudo das bases moleculares da especificidade pelo substrato de uma beta-glicosidade (AF052729) de Spodoptera frugiperda [Internet]. 2006 ;[citado 2026 abr. 08 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-19092006-163823/ - Arranjos supramoleculares de oligodeoxinucleotídeos e fragmentos de bicamada catiônica: preparação, caracterização e atividade imunoadjuvante
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