Inibição da atividade de uma nova serinoprotease isolada do veneno de B. jararacussu utilizando a biblioteca de fragmentos de anticorpos recombinantes Griffin.1 (2006)
- Authors:
- Autor USP: MOTA JÚNIOR, ANDRÉ OLIVEIRA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Subjects: IMUNOQUÍMICA; IMUNOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Venenos de serpentes são ricas fontes de proteínas e peptídeos ativos. Proteínas de veneno com atividade procoagulante são úteis para o tratamento de complicações trombóticas e hemostáticas e ainda colaboram para o entendimento das reações moleculares. As enzimas trombina-símiles, grupo de glicoproteínas do veneno de serpentes com propriedades pro-coagulantes, são serinoproteases de cadeia única que compartilham alto grau de homologia com a trombina humana. A serinoprotease denominada BjussuSP-I isolada do veneno bruto de B. jararacussu apresenta potencial terapêutico como agente desfibrinogenante. Produzir anticorpos contra essa toxina para auxílio co-terápico de acidentes ofídicos ou para compreensão dos mecanismos de ação dessa proteína poderá levar, futuramente, ao desenvolvimento de modelos para novos fármacos. Neste trabalho foi explorado o uso da biblioteca de anticorpos humanos Griffin.1 para o isolamento de fragmento de anticorpos (scFv) contra a toxina BjussuSP-I. O protocolo adotado para a seleção dos fagos-anticorpos contra BjussuSP-I foi o de imobilização das proteínas em imunotubo. Foram realizados três turnos de seleção e os fagos-anticorpos selecionados do primeiro turno apresentaram maior título de anticorpos específicos para a proteína e foram escolhidos para a produção de fagos-anticorpos monoclonais. Após a padronização de um método de quantificação da atividade coagulante, in vitro, compatível com as necessidades deste trabalho, pôde-seidentificar três clones capazes de inibir a atividade coagulante da toxina. Esses clones foram utilizados para a produção de fragmentos solúveis de anticorpos, porém, devido à ausência de marcadores que facilitam a detecção destes anticorpos, não foi possível purificar os scFv. Visando a obtenção de scFv puro, os sobrenadantes dos clones selecionados foram submetidos a purificação parcial em gel Sephadex-G75, de onde foram eluidas duas frações de ) proteínas, denominados de F1 e F2. A maior quantidade de moléculas de scFv encontrou-se na fração FI, porém ensaios de atividade coagulante demostraram que a fração F1 dos clones selecionados não provocavam inibição da atividade coagulante da toxina. Por outro lado as frações F2 dos clones inibiram fortemente. Portanto algum fator do sobrenadante de bactéria provocou inibição da atividade coagulante da toxina BjussuSP-I. Ensaios realizados em seguida, mostraram que essa atividade inibitória presente na fração F2 atua de maneira dose resposta inibindo a atividade coagulante da toxina e de venenos brutos. Esta ação inibitória não é produzida penas pelos clones selecionados, mas também por cepas de E. coli não infectadas. Ainda, a expressão dessa atividade de inibição da fração F2 apresenta diminuição de expressão quando as culturas sofrem indução com IPTG (isopropil-'beta'-D-tiogalactosídeo). A fração F2 também foi capaz de promover aglutinação de eritrócitos de carneiro além de inibir a atividade coagulante da toxinaBjussuSP-I. Estas atividades foram suprimidas quando as frações F2 foram incubadas previamente com EDTA e/ou glicoproteína (fetuina)
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2006
- Data da defesa: 25.01.2006
-
ABNT
MOTA JÚNIOR, André Oliveira. Inibição da atividade de uma nova serinoprotease isolada do veneno de B. jararacussu utilizando a biblioteca de fragmentos de anticorpos recombinantes Griffin.1. 2006. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2006. . Acesso em: 28 jan. 2026. -
APA
Mota Júnior, A. O. (2006). Inibição da atividade de uma nova serinoprotease isolada do veneno de B. jararacussu utilizando a biblioteca de fragmentos de anticorpos recombinantes Griffin.1 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Mota Júnior AO. Inibição da atividade de uma nova serinoprotease isolada do veneno de B. jararacussu utilizando a biblioteca de fragmentos de anticorpos recombinantes Griffin.1. 2006 ;[citado 2026 jan. 28 ] -
Vancouver
Mota Júnior AO. Inibição da atividade de uma nova serinoprotease isolada do veneno de B. jararacussu utilizando a biblioteca de fragmentos de anticorpos recombinantes Griffin.1. 2006 ;[citado 2026 jan. 28 ]
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
