Microarranjo de cDNA ORESTES e bibliotecas subtrativas aplicados a modelo de melanoma humano indicam novos genes com potencial importância na progressão tumoral (2005)
- Authors:
- Autor USP: SOUSA, JOSANE DE FREITAS - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: GENOMAS; GENÉTICA MÉDICA
- Language: Português
- Abstract: O melanoma é uma neoplasia muito agressiva e que apresenta grande resistência , terapêutica. A progressão do tumor ocorre através de três principais estágios: a fase de crescimento radial (RGP), a fase de crescimento vertical (VGP) e a metástase. As células em fase de crescimento radial ficam confinadas à epiderme, em contraste com aquelas da fase de crescimento vertical que invadem a derme e já apresentam competência para a metástase. Embora haja um grande número de estudos sobre melanoma, as bases moleculares da sua progressão não estão claramente definidas. Linhagens celulares estabalecidas, de diferentes fases da progressão tumoral de melanomas humanos, servem como modelos experimentais com grande potencial para a identificação e caracterização de genes com papel na progressão tumoral. Nosso objetivo consistiu em utilizar uma coleção dessas linhagens para análise da expressão gênica diferencial, permintindo assim identificar e iniciar a caracterização de novos genes envolvidos na progressão tumoral. A primeira abordagem consistiu em selecionar, através de minuciosa análise in silico, fragmentos ORESTES (Open Reading Frame ESTs) gerados pelo Projeto Genoma Humano do Câncer, que alinham em regiões cromossômicas cujos rearranjos são freqüentemente associados com melanoma. Em um ensaio piloto, utilizando dot blots contendo 137 fragmentos ORESTES que mapeam nas regiões cromossômicas 1p36, 1p11- 12 e 1q21, foram detectados, e posteriormente confirmados porNorthem blot, 4 genes diferencialmente expressos entre uma linhagem de melanoma obtida de um tumor em fase de crescimento vertical e uma linhagem da metástase derivada da primeira. Em uma etapa seguinte, a análise do perfil de expressão de linhagens representando as fases radial, vertical e metastática da progressão tumoral, com o uso de um microarranjo de clones ORESTES representando genes das regiões 1p36, 6q21-23 e 9p21, revelou um pequeno, porém significativo, número de genes, diferencialmente expressos, entre eles dois genes sem função conhecida (C6ORF51) e C9ORF82) com potencial papel de supressor de tumor. Em uma outra abordagem, através da construção de bibliotecas subtrativas nós obtivemos, conforme validação por diferentes ensaios, duas grandes coleções de genes diferencialmente expressos entre os estágios de crescimento radial e metastático do melanoma. Dentre os genes detectados, existem genes já conhecidamente envolvidos na progressão tumoral, genes ainda não associados ao processo e um grande número de genes de função desconhecida. O uso dos clones das bibliotecas subtrativas em ensaios de microarranjos revelou que um maior número de eventos de repressão gênica parece estar associado a progressão do estágio de crescimento radial para os estágios mais avançados, enquanto na transição da fase vertical para a metástase houve um maior número de superexpressão de genes. Além disso, nós selecionamos para estudos funcionais umdos genes detectados no ensaio piloto (KIAA0090), para o qual nenhuma função é conhecida. Duas diferentes construções da proteína, em fusão com a EGFP, quando expressas em quatro linhagens de melanoma mostraram diferentes padrões de distribuição e colocalização da proteína com organelas celulares, além de afetarem a viabilidade celular, também em níveis diferentes
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2005
- Data da defesa: 01.09.2005
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ABNT
SOUSA, Josane de Freitas. Microarranjo de cDNA ORESTES e bibliotecas subtrativas aplicados a modelo de melanoma humano indicam novos genes com potencial importância na progressão tumoral. 2005. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2005. . Acesso em: 10 ago. 2024. -
APA
Sousa, J. de F. (2005). Microarranjo de cDNA ORESTES e bibliotecas subtrativas aplicados a modelo de melanoma humano indicam novos genes com potencial importância na progressão tumoral (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Sousa J de F. Microarranjo de cDNA ORESTES e bibliotecas subtrativas aplicados a modelo de melanoma humano indicam novos genes com potencial importância na progressão tumoral. 2005 ;[citado 2024 ago. 10 ] -
Vancouver
Sousa J de F. Microarranjo de cDNA ORESTES e bibliotecas subtrativas aplicados a modelo de melanoma humano indicam novos genes com potencial importância na progressão tumoral. 2005 ;[citado 2024 ago. 10 ]
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