Geração de duas populações celulares transgênicas superexpressando os genes BCRABL parcial e B7.1 (2005)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, FABIOLA SINGARETTI DE - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RCM
- Subjects: TRANSFERÊNCIA DE GENES; CLÍNICA GERAL
- Language: Português
- Abstract: A Leucemia Mielóide Crônica é uma doença mieloproliferativa clonal das células progenitoras hematopoéticas e apresenta uma incidência de 1-2 casos/100.000 habitantes/ano. Molecularmente, a LMC é a leucemia melhor caracterizada, sendo resultado da translocação recíproca entre os cromossomos 9 e 22 gerando o gene híbrido BCRABL. Este gene bcr-abl codifica uma proteína de 210 KDa com elevada atividade tirosina quinase, cuja presença é suficiente para a transformação neoplásica. Atualmente, as principais formas de terapia para a LMC são: a) transplante alogênico de células progenitoras; b) hidroxiuréia; c) interferon-'alfa' sozinho ou em associação com cytosine arabinoside (ara-C) e, mais recentemente, d) inibidores da transdução de sinal; e) oligonucleotídeos sintéticos. Entretanto, na maioria dos casos, a cura não é obtida. Outra alternativa consiste na modificação genética das células dendrítícas (DCs), as quais apresentam a capacidade de capturar e processar o antígeno, assim como iniciar a resposta imune celular e humoral. DCs pulsadas com peptídeos bcrabl específicos da região de fusão BCRABL promovem uma alta resposta T - citotóxica específica. Ainda, a instabilidade dos peptídeos, associada ao número restrito de peptídeos bcrabl ligantes a molécula de MHC classe específica, são fatores limitantes. Uma alternativa seria a geração de células dendríticas modificadas geneticamente superexpressando regiões parciais BCRABL, incluindo a região de fusão. Além disso, sabe-seque em diversos tumores as DCs expressam baixos níveis da molécula co-estimuladora B7.1 quando comparado à indivíduos normais. Como a molécula B7.1 é necessária para a ativação adequada dos linfócitos T naive, uma outra alternativa de estudo seria a indução da resposta imune frente a super-expressão de B7.1. Deste modo, o principal objetivo deste projeto foi a construção de vetores retrovirais recombinantes contendo os genes de interesse, ... B7.1 e BCRABL parcial, e posterior geração de uma população celular anfotrópica transgênica produtora dos retrovírus terapêuticos. O vetor retroviral selecionado, denominado pBMN-I-GFP, apresenta o gene GFP, o qual permite a identificação das células transgênicas através da expressão da proteína de ftuorescência verde verificada por citometria de fluxo. O gene BCRABL parcial foi isolado a partir do plasmídeo MIGR1, portador do cDNA completo BCRABL, enquanto que o gene B7.1 foi amplificado a partir do RNA total de células dendríticas de indivíduo normal. Ambos foram clonados em vetor pCR2.1 e subclonados em vetor retroviral pBMN-I-GFP através dos sítios das enzimas de restrição Xhol e Notl. Realizou-se transfecção dos vetores retrovirais recombinantes em células ecotrópicas, 'EcoPack2 POT.TM'- 293, e posterior transdução retroviral em linhagem celular anfotrópica, PG13/LNc8. Em seguida, foram selecionados os clones celulares anfotrópicos que apresentaram alto título retroviral, ou seja, capacidade deinfectar adequadamente células alvo. Tais clones foram armazenados e serão utilizados na segunda parte do projeto que consiste na modificação genética das DCs de pacientes com LMC
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2005
- Data da defesa: 12.08.2005
-
ABNT
OLIVEIRA, Fabíola Singaretti de. Geração de duas populações celulares transgênicas superexpressando os genes BCRABL parcial e B7.1. 2005. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2005. . Acesso em: 29 dez. 2025. -
APA
Oliveira, F. S. de. (2005). Geração de duas populações celulares transgênicas superexpressando os genes BCRABL parcial e B7.1 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Oliveira FS de. Geração de duas populações celulares transgênicas superexpressando os genes BCRABL parcial e B7.1. 2005 ;[citado 2025 dez. 29 ] -
Vancouver
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