Avaliação da síntese protéica da córnea de coelho preservada em Optisol-GS® (2005)
- Authors:
- Autor USP: SEIXAS, GISELLE OLIVEIRA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: ROO
- Assunto: OFTALMOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: OBJETIVO: As córneas humanas são preservadas em meio de Optisol- GS® para transplante, no entanto pouco se sabe sobre o tempo máximo de preservação. Este estudo tem o objetivo de analisar o perfil de síntese e secreção de proteínas de córneas de coelho preservados por 0, 4, 7, 14 e 21 dias nesse meio e determinar o peso molecular aparente da proteína secretada pelo endotélio p20/30. MATERIAL E MÉTODOS: Foram utilizadas 16 córneas de coelhos albinos, machos, dos quais duas para preservar por 0 dias, quatro por 4 dias, três por 7 dias, três por 14 dias e 4 por 21 dias. As córneas de coelho foram retiradas sob assepsia e armazenadas em meio de Optisol-GS® e mantidas a 4° C. Foram retiradas do Optisol-GS® e incubadas em meio de cultura RPMI-1640 com prolina-'ANTIPOT. 3 H', 50 'mü'l = 50 'mü'Ci, a 37°C em estufa com atmosfera enriquecida com 5% de CO2 por 20 horas. Após o tempo de cultura, os meios foram centrifugados e os sobrenadantes dialisados por 24 horas. Os precipitados (depósito do fundo do microfuge Eppendorf ®) resultantes da centrifugação foram re-suspensos e processados para serem submetidos à técnica de western blot. Foram feitas dosagens de proteínas e medidas radiométricas dos meios de cultura dialisados, dos tecidos, dos meios e dos precipitados. O volume restante do meio de cultura foi liofilizado e re-suspenso em solução de amostra (SA) para eletroforese. As córneas cultivadas foram divididas em três partes: um dos fragmentos foi dissolvido em SDS4% para posterior dosagem de proteínas, o outro em SA, para eletroforese e o terceiro utilizado para análise histológica em parafina ou auto-radiografia. As amostras de tecidos e meios processados como descrito acima, foram submetidas a SDS-PAGE, seguido de fluorografia. Os géis foram expostos contra filme (Hyperfilm) e mantidos à -80°C por períodos de tempo variáveis ao fim dos quais foram revelados. A partir das fluorografias colocar seus dados no ... programa IMAGE J, e determinar o peso aparente da proteína p20/30. RESULTADOS: Na eletroforese e nos perfis fluorográficos foi possível ver a proteína secretada pelo endotélio que tem peso molecular entre 20 e 30 KDa (p20/30) e determinamos seu peso aparente em 25KDa. No western blot, não foi possível detectar a presença de citoceratina. A análise histológica reforça a hipótese de lise celular do epitélio corneano, uma vez que foi observada extensa desepitelização das córneas analisadas. As auto-radiografias mostraram incorporação da prolina - 'ANTIPOT. 3 H' a todas as camadas da córnea, mas com diminuição desta ao longo do tempo de preservação. A AE dos meios apresentou queda progressiva, enquanto a dos tecidos aumentou com o tempo. A contagem endotelial apresentou aumento com maior o tempo de preservação. CONCLUSÕES: As fluorografias indicam que o endotélio continua secretando suas proteínas mesmo com maior tempo de preservação. A partir do western blot não podemos concluir quaissão os componentes do precipitado. A desepitelização vista na histologia pode ser a responsável pela liberação de prolina - 'ANTIPOT. 3 H' incorporada ao epitélio. A queda da incorporação de prolina - 'ANTIPOT. 3 H' observada nas auto-radiografias sugere queda na síntese de proteínas pela córnea. A progressiva diminuição da AE nos meios de incubação conforme o aumento no tempo sugere que com o armazenamento haja uma perda progressiva da capacidade de síntese e secreção das células endoteliais. O aumento da AE do tecido pode refletir uma quebra da barreira epitelial e difusão de prolina - 'ANTIPOT. 3 H' incorporada às proteínas para o tecido. O aumento da contagem endotelial observada provavelmente é devido ao encurvamento das córneas e erro de leitura do microscópio eletrônico
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2005
- Data da defesa: 16.05.2005
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ABNT
SEIXAS, Giselle Oliveira. Avaliação da síntese protéica da córnea de coelho preservada em Optisol-GS®. 2005. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2005. . Acesso em: 14 nov. 2024. -
APA
Seixas, G. O. (2005). Avaliação da síntese protéica da córnea de coelho preservada em Optisol-GS® (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Seixas GO. Avaliação da síntese protéica da córnea de coelho preservada em Optisol-GS®. 2005 ;[citado 2024 nov. 14 ] -
Vancouver
Seixas GO. Avaliação da síntese protéica da córnea de coelho preservada em Optisol-GS®. 2005 ;[citado 2024 nov. 14 ]
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