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Detecção de Mycoplasma pneumoniae, pela técnica PCR, em escarrro de pacientes com infecção respiratória aguda residentes em Ribeirão Preto - SP (2005)

  • Authors:
  • Autor USP: BROCHADO, MARIA JOSE FRANCO - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RCM
  • Subjects: INFECÇÕES RESPIRATÓRIAS; MYCOPLASMA; CULTURA DE MICRORGANISMOS
  • Language: Português
  • Abstract: Mycoplasma pneumoniae é responsável por cerca de 10 a 30% dos casos de pneumonia comunitária adquirida. A maioria dos pacientes desenvolve traqueobronquite, doenças do trato respiratório superior e ou inferior, e 15% permanecem assintomáticos. Os achados clínicos são insuficientes para distinguir pneumonia por micoplasma da ocasionada por outros patógenos, sendo necessário o diagnóstico laboratorial. Os objetivos deste estudo foram aplicar a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em amostras de escarro para diagnóstico laboratorial de M. pneumoniae e comparar os resultados obtidos com método imunoenzimático (ELISA) na mesma população. Utilizaram-se 61 amostras de escarros de 31 pacientes, com idade entre 17 a 70 anos, residentes em Ribeirão Preto, São Paulo. Foram colhidas de trinta pacientes amostras de escarro em duplicata, e de um paciente apenas uma. Uma das amostras de escarro foi submetida a descontaminação pelo Método de Petroff e a outra estocada in natura. O DNA das amostras de escarros in natura e descontaminado foi extraído por fenol-clorofórmio e purificado utilizando-se kit GFX PCR DNA gel band purification. Para detecção de M.pneumoniae pela técnica de PCR foram utilizados primers que amplificam fragmento de 861 pb da porção 16S rRNA. A especificidade da amplificação do DNA foi avaliada pelo padrão de restrição por digestão do produto amplificado com enzima de restrição Xba I, resultando em fragmentos de 420 e 441 pb. Paralelamente, aplicou-se a PCRpara detecção de M.genitalium com intuito de se eliminar possíveis reações cruzadas com M.pneumoniae. Para esta PCR, utilizaram-se primers específicos que amplificam um fragmento de 809 pb do gene 16S rRNA de M.genitalium. Como controles positivos da PCR utilizou-se DNA extraído por fenol-clorofórmio de cepas FH M.pneumoniae e ATCC M.genitalium cultivadas separadamente em caldo SP4; como controles negativos utilizou-se reagentes da PCR (continua...) acrescido de água estéril, além disso, o DNA extraído das amostras de escarro in natura e descontaminado foram submetidos à pesquisa da beta globina humana. Em todas as amostras detectou-se um produto de 268 bp, certificando a presença do gene da globina humana e indicando integridade do DNA. Os primers selecionados permitiram a detecção de M.pneumoniae em cultura pela observação do produto amplificado de 861 pb, assim como, a detecção de M.genitalium em cultura com primers específicos pela observação do produto de 809 pb. PCR para M. pneumoniae resultou positiva em uma amostra das 61 amostras de escarro analisadas, sendo positiva somente na amostra de escarro descontaminado. M. genitalium não foi detectado em nenhuma das amostras de escarro analisadas. A concordância entre o Elisa IgM no soro e PCR em amostras de escarro in natura foi de 96,7% e entre Elisa IgM no soro e PCR em amostras de escarro descontaminado foi de 93,3%. A concordância entre o Elisa IgG no soro e a PCR em amostras de escarro innatura foi de 43,75% e entre o Elisa IgG e a PCR em amostras de escarro descontaminado foi de 33,3%. Conclui-se que os primers utilizados para detecção do M.pneumoniae são inespecíficos, havendo reação cruzada com M. genitalium, no ciclo de PCR utilizado. A PCR para M. pneumoniae mostra ser um método adicional útil para o diagnóstico etiológico de infecções das vias aéreas superiores e inferiores.
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 14.04.2005

  • How to cite
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    • ABNT

      BROCHADO, Maria José Franco; MACHADO, Alcyone Artioli. Detecção de Mycoplasma pneumoniae, pela técnica PCR, em escarrro de pacientes com infecção respiratória aguda residentes em Ribeirão Preto - SP. 2005.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2005.
    • APA

      Brochado, M. J. F., & Machado, A. A. (2005). Detecção de Mycoplasma pneumoniae, pela técnica PCR, em escarrro de pacientes com infecção respiratória aguda residentes em Ribeirão Preto - SP. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Brochado MJF, Machado AA. Detecção de Mycoplasma pneumoniae, pela técnica PCR, em escarrro de pacientes com infecção respiratória aguda residentes em Ribeirão Preto - SP. 2005 ;
    • Vancouver

      Brochado MJF, Machado AA. Detecção de Mycoplasma pneumoniae, pela técnica PCR, em escarrro de pacientes com infecção respiratória aguda residentes em Ribeirão Preto - SP. 2005 ;


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