Mutagênese biológica em Streptomyces avermitilis: aplicação do Transposon Tn 5424 para geração de mutantes na bactéria produtora de avermectina (2003)
- Authors:
- Autor USP: AIKAWA, MARCIA - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMM
- Subjects: MICROBIOLOGIA; STREPTOCOCCUS; MUTAGÊNESE
- Language: Português
- Abstract: Diante dos avanços da tecnologia do DNA recombinante, a obtenção de mutantes para estudos genéticos, bioquímicos e fisiológicos tornaram-se cada vez mais freqüentes. A utilização da mutagênese clássica, pôr indução química ou física, apesar de fácil implementação, torna difícil a localização dos genes afetados. A mutagênese biológica, nesse sentido, pode facilitar a inserção de DNA exógeno em segmentos específicos do cromossomo, gerando mutantes com características peculiares de interesse. Em 1994 foi construído o transposon composto Tn 5424 (Irnish & Cullum). Ele alberga em sua região terminal duas seqüências de inserção do módulo IS466, sendo uma das inserções, correspondente apenas a porção final do IS, tendo como marcador genético de seleção, o gene de resistência a tioestrepton. Sua principal característica refere-se a estabilidade da inserção sem evidências de grandes rearranjos genéticos no DNA da bactéria hospedeira. Em Streptomyces avermitilis, produtor do antiparasitário avermectina, transformantes da linhagem selvagem (ATCC 31267) e da linhagem IPT-85 foram obtidos a freqüências de 1,3 x 101 transformantes/ g DNA e 6,5 x 101 transformantes/ g DNA. Já, a freqüência de transposição foi de cerca de 0,4% na população mutagenizada.) Mutantes morfológicos e com a produção de avermectina alterada foram isolados através desse novo sistema. Tn 5424 parece inserir-se aleatoriamente, em diferentes regiões no DNA de S. avermitilis, sem evidências de rearranjosgenéticos aparentes. Transposantes de S. avermitilis mantiveram ainda, a marca de resistência a tioestrepton a uma concentração de 100 g/mL em cultivos na ausência de pressão seletiva. Técnicas de PCR reverso da região flanqueadora do Tn 5424 geraram 5 produtos de amplificação (dois de 650pb; um de 600pb; e dois de 450pb). A clonagem desses produtos, permitirão o seqüenciamento da região cromossômica afetada pelo transposon em Streptomyces avermitilis e sua possível utilização como sítio alvo para inserção de genes distintos e expressão de novos produtos.
- Imprenta:
- Data da defesa: 21.07.2003
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ABNT
AIKAWA, Marcia. Mutagênese biológica em Streptomyces avermitilis: aplicação do Transposon Tn 5424 para geração de mutantes na bactéria produtora de avermectina. 2003. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2003. . Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Aikawa, M. (2003). Mutagênese biológica em Streptomyces avermitilis: aplicação do Transposon Tn 5424 para geração de mutantes na bactéria produtora de avermectina (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Aikawa M. Mutagênese biológica em Streptomyces avermitilis: aplicação do Transposon Tn 5424 para geração de mutantes na bactéria produtora de avermectina. 2003 ;[citado 2024 abr. 24 ] -
Vancouver
Aikawa M. Mutagênese biológica em Streptomyces avermitilis: aplicação do Transposon Tn 5424 para geração de mutantes na bactéria produtora de avermectina. 2003 ;[citado 2024 abr. 24 ]
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