Identificação, clonagem e expressão de proteínas da fração vesicular de Leishmania major com possíveis funções na relação parasita/hospedeiro (2004)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, ARTHUR HENRIQUE CAVALCANTE DE - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: LEISHMANIA; BIOLOGIA CELULAR; BIOLOGIA MOLECULAR
- Language: Português
- Abstract: O parasita Leishmania é o agente causador da leishmaniose. Essa doença afeta cerca de 12 milhões de pessoas que, em sua maioria, vivem em países subdesenvolvidos. Assim, a leishmaniose é considerada um problema de saúde mundial pela O.M.S. (Organização Mundial de Saúde). Os estudos bioquímicos e de biologia molecular podem ajudar no entendimento da biologia do parasita e, assim, colaborar no combate à doença. Os objetivos do projeto foram identificar, clonar e expressar proteínas da fração vesicular das formas promastigotas de Leishmania major e Leishmania amazonensis. A etapa inicial desse estudo consistiu no fracionamento das formas promastigotas para o enriquecimento das amostras com a fração vesicular. Após a ruptura das vesículas, as proteínas solúveis foram separadas por géis unidimensional e bidimensional e analisadas por espectrometria de massa. ESI-Ms/MS e MALDI-TOF/MS foram usadas para identificação das proteinas através do mapeamento das massas de peptídeos tripsínicos ("peptide mass fingerprint", PMF). Essa técnica possibilitou a análise de 74 "spots" de proteínas, resultando na identificação de 28 deles. A identificação das proteínas presentes no extrato solúvel de vesículas possibilitou a seleção de três, possivelmente secretadas, como alvos de estudo para investigação de suas funções na biologia da Leishmania. Foram selecionadas: a nucleosídeo difosfato kinase b (NDK-b); a protease calpaína-"like" (CLP) e a carboxipeptídase termoestável (TCP).As seqüências codíficadoras foram obtidas por PCR de DNA genômico de L. major e clonadas nos vetores pT7T3 e pET28a. As construções em pET28a foram usadas para a expressão das proteínas em E. coli BL21(DE3)pLysS e resultaram em duas proteínas solúveis, a NDK e a CLP, e uma insolúvel, a TCP. As três proteínas tiveram bons níveis de expressão. As proteínas NDK e CLP foram parcialmente purificadas por cromatografia de afinidade. As proteínas NDK e TCP, ... expressadas em E. coli, tiveram sua identificação confirmada por ESI-MS/MS. Portanto, a estratégia aplicada nesse estudo, baseada na caracterização do proteoma subcelular, demonstra que a biologia molecular e a bioquímica podem contribuir para a elucidação de processos envolvidos no mecanismo de invasão do hospedeiro pelo parasita e, conseqüentemente, para o desenvolvimento de drogas ou estratégias de combate ao parasita
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2004
- Data da defesa: 20.12.2004
-
ABNT
OLIVEIRA, Arthur Henrique Cavalcante. Identificação, clonagem e expressão de proteínas da fração vesicular de Leishmania major com possíveis funções na relação parasita/hospedeiro. 2004. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2004. . Acesso em: 28 dez. 2025. -
APA
Oliveira, A. H. C. (2004). Identificação, clonagem e expressão de proteínas da fração vesicular de Leishmania major com possíveis funções na relação parasita/hospedeiro (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Oliveira AHC. Identificação, clonagem e expressão de proteínas da fração vesicular de Leishmania major com possíveis funções na relação parasita/hospedeiro. 2004 ;[citado 2025 dez. 28 ] -
Vancouver
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