Modulação do promotor do gene NHE3 por paratormônio (2004)
- Authors:
- Autor USP: REBOUCAS, NANCY AMARAL - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: FISIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivo: Em trabalho prévio do mesmo laboratório, demonstramos que o efeito inibitório que o tratamento crônico com paratormônio PTH exerce sobre a atividade de NHE3 em túbulos proximais está associado com redução nos níveis de mRNA- e de proteína-NHE3. O principal objetivo do presente estudo é investigar se o efeito do PTH se deve a regulação da transcrição do gene NHE3. Métodos e Resultados: Para avaliar a sensibilidade da região regulatória do gene NHE3 a PTH, nós clonamos a região promotora do gene no vetor pGL3basic, de tal modo que o promotor NHE3 exercesse o controle da transcrição do gene repórter luciferase (Firefly luciferase). Utilizando PCR e depois digestão com endonucleases específicas, obtivemos os seguintes constructos em pGL3, cuja numeração se baseia no mapeamento da região promotora de NHE3 feito por Kandasamy e Orlowski: 1) - 2.095 a + 55 , que é nosso constructo maior; 2) - 2,095 a -17, que inclui o ponto início de transcrição mapeado por Cano, mas não o mapeado por Orlowski; 3) - 1.196 a +55; 4) - 467 a + 55; 5) - 152 a + 55.Células OKP, uma linhagem de túbulos proximais de rim de opossum que endogenamente expressa recepor para PTH, foram transfectadas com os constructos em pGL3 ou com pGL3-basic, que é nosso controle sem promotor. Para controle da eficiência de transfecção, as células foram simultaneamente transfectadas com pRL-CMV, vetor contendo o gene repórter Renila luciferase controlado pelopromotor CMV. Quatro horas após a transfecção, já em meio sem soro, o meio era substituído por meio contendo PTH, 10-7 ou 10-8 M. A atividade de luciferase era avaliada após 6, 16, 24 ou 48 horas.Observamos repressão significativa da atividade do promotor pelo PTH apenas com o constructo - 152 a +55, redução de 131,4 ± 31,7 para 73,0 ± 6,0 (atividade de luciferase firefly/renila do constructo específico em relação a pGL3-basic); a inibição foi mais evidente com 6 e 16 horas, mas ainda estava presente com 24 horas. A atividade do promotor foi significativamente mais elevada com o constructo - 152 a +55 que com os demais constructos (contructo - 2.095 + 55: 18,1 ± 48,4; constructo - 152 a + 55: 131,4 ± 31,7), mostrando que existem importantes elementos inibitórios da atividade do promotor à montante da posição - 152. Conclusões: PTH excerve efeito inibitório sobre o promotor do gene NHE3 que só pode ser detectado com constructos compreendendo a região - 152 a + 55; acima da posição - 152 existem elementos inibitórios importantes que parecem se sobrepor ao efeito inibitório do PTH, dificultando a visualização desse efeito quando avaliamos regiões mais extensas do promotor.
- Imprenta:
- Publisher place: Águas de Lindóia
- Date published: 2004
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental, FeSBE
-
ABNT
NOGUEIRA, C. e GIRARDI, A. e REBOUÇAS, Nancy Amaral. Modulação do promotor do gene NHE3 por paratormônio. 2004, Anais.. Águas de Lindóia: Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, 2004. . Acesso em: 26 set. 2024. -
APA
Nogueira, C., Girardi, A., & Rebouças, N. A. (2004). Modulação do promotor do gene NHE3 por paratormônio. In Resumos. Águas de Lindóia: Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo. -
NLM
Nogueira C, Girardi A, Rebouças NA. Modulação do promotor do gene NHE3 por paratormônio. Resumos. 2004 ;[citado 2024 set. 26 ] -
Vancouver
Nogueira C, Girardi A, Rebouças NA. Modulação do promotor do gene NHE3 por paratormônio. Resumos. 2004 ;[citado 2024 set. 26 ] - Cloning of the 5' FLANKING SEQUENCE OF A RABBIT 'na pot.+'-'H pot.+' EXCHANGER GENE ('na'h-1)
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