Detecção de enterotoxinas estafilocócicas produzidas por Staphylococcus aureus no leite bovino por eletroforese capilar e identificação dos isolados enterotoxigênicos via PCR (2003)
- Authors:
- Autor USP: CHAPAVAL, LEA - CENA
- Unidade: CENA
- Subjects: HIGIENE VETERINÁRIA; INTOXICAÇÃO ALIMENTAR; MICROBIOLOGIA; SEGURANÇA ALIMENTAR; BOVINOS LEITEIROS
- Language: Português
- Abstract: O interesse na quantificação das enterotoxinas se deve ao fato do conhecimento atual sobre a ação nociva destas à saúde humana e da necessidade da certificação do leite e seus derivados, tendo como principal efeito a garantia de qualidade alimentar tanto para o consumo interno como para exportação, dentro dos padrões internacionais. Neste trabalho foram avaliados por técnicas moleculares através de PCR (Polymerase Chain Reaction), a presença de genes enterotoxigênicos (SEA a SEE) e genes da TSST-1 em StaphyIococcus aureus provenientes de 132 amostras de leite da região da cidade de Piracicaba - SP e de duas fazendas leiteiras com diferentes níveis de manejo de ordenha foram avaliados por técnicas moleculares através de PCR (Polymerase Chain Reaction). Para otimização da metodologia de extração de DNA de S. Aureus, desenvolveu-se um protocolo sem o uso de lisoestafina, diminuindo assim o custa operacional. Posteriormente verificou-se o potencial de produção de enterotoxina estafilocócica nas amostras positivas (cepas contendo um ou mais genes enterotoxigênicos), através do uso da técnica de celofane sobre ágar e detecção pelo método da Sensibilidade Ótima em Placas (OSP). Todas as cepas foram examinadas para SEA, SEB, SEC2, SED e SEE. Amostras que se mostraram positivas para produção de enterotoxina estafilocócica tipo C2 (SEC2) foram posteriormente analisadas através da Eletroforese Capilar de Zona para a detecção deste metabólito, a partir dosextratos obtidos pela técnica de OSP. A metodologia de extração de DNA desenvolvida rendeu maiores quantidades de DNA quando comparada a metodologias anteriormente publicadas para esta finalidade, mostrando coeficiente de variação menor (C.V. 41,44% com P< 0,01% em relação a 89,15% com a metodologia comparada). continua... ) A qualidade do DNA também foi satisfatória para amplificação dos produtos de PCR para todos as cepas de Staphylococeus aureus testadas. Com relação à detecção de genes enterotoxigênicos (SEA a SEE) e gene da TSST-1, a técnica de PCR mostrou-se eficiente com relação às amostras avaliadas, sendo que 69,7% das amostras se mostraram positivas para a presença de um ou mais genes. Em nossos estudos, das 92 amostras de StaphyIococcus aureus analisadas, 15,22% de mostraram positivas para produção de enterotoxina A (SEA), 29,35% para produção de enterotoxina B (SEB), 5,44% para produção de enterotoxima C2 (SEC2), 4,35% para produção concomitante de SEA e SEB e 2,17% para produção de concomitante de SEB e SEC2. A técnica de Eletroforese Capilar de Zona (CZE), usada para quantificação da enterotoxina estafilocócica C2 a partir do sobrenadante de cultura obtido através da técnica de celofane sobre ágar mostrou níveis de detecção compatíveis com a técnica de Sensibilidade Ótima em Placas (OSP), tendo apresentado boa precisão, repetibilidade e rapidez na detecção de SEC2. Um outro estudo avaliou o efeito do estresse térmico na produção das SEs em leite ecomprovou que a temperatura pode influir de maneira significativa na produção de SEs em leite, atentando-se para que as recomendações quanto à higiene e refrigeração da produção até a comencialização sejam efetivamente respeitadas
- Imprenta:
- Publisher place: Piracicaba
- Date published: 2003
- Data da defesa: 26.11.2003
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ABNT
CHAPAVAL, Lea. Detecção de enterotoxinas estafilocócicas produzidas por Staphylococcus aureus no leite bovino por eletroforese capilar e identificação dos isolados enterotoxigênicos via PCR. 2003. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2003. . Acesso em: 15 set. 2024. -
APA
Chapaval, L. (2003). Detecção de enterotoxinas estafilocócicas produzidas por Staphylococcus aureus no leite bovino por eletroforese capilar e identificação dos isolados enterotoxigênicos via PCR (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Piracicaba. -
NLM
Chapaval L. Detecção de enterotoxinas estafilocócicas produzidas por Staphylococcus aureus no leite bovino por eletroforese capilar e identificação dos isolados enterotoxigênicos via PCR. 2003 ;[citado 2024 set. 15 ] -
Vancouver
Chapaval L. Detecção de enterotoxinas estafilocócicas produzidas por Staphylococcus aureus no leite bovino por eletroforese capilar e identificação dos isolados enterotoxigênicos via PCR. 2003 ;[citado 2024 set. 15 ]
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