Aspectos moleculares da resistência à drogas e patogenicidade de Trichophyton rubrum: identificação e caracterização funcional de um transportador do tipo ABC e análise do transcriptoma deste dermatófito (2003)
- Authors:
- Autor USP: CERVELATTI, ELIANE PATRICIA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- Subjects: EXPRESSÃO GÊNICA; GENÉTICA MOLECULAR
- Language: Português
- Abstract: Trichophyton rubrum é o dermatófito mais freqüentemente encontrado em lesões superficiais de pele e unha. Estudos envolvendo este patógeno se tomam cada vez mais importantes, pois linhagens resistentes aos medicamentos atualmente disponíveis no mercado e o comportamento invasivo deste agente em pacientes com o sistema imune comprometido têm sido relatados com freqüência. Estes fatos levam à necessidade do desenvolvimento de novos medicamentos mais eficientes e com efeitos colaterais minimizados, o que implica na necessidade de se ampliar o conhecimento sobre a biologia dos fungos patogênicos de uma maneira geral. Visando colaborar nesse sentido, o presente trabalho teve três objetivos centrais: 1) identificar e caracterizar um transportador do tipo ABC (ATP-Binding Cassete) em T.rubrum, uma proteína de membrana responsável pelo efluxo de drogas em diversos organismos; 2) determinar o cariótipo eletroforético e iniciar o mapeamento físico de genes de. interesse neste patógeno e 3) determinar o transcriptoma deste fungo,o em condições normais de cultivo e posteriormente comparar os resultados obtidos com os de fungos modelos buscando genes essenciais descritos como sendo exclusivos de fungos. Através de PCR utilizando oligonucleotídeos degenerados foi identificado o gene atrE. Este gene possui 4838 pb e codifica uma proteína que apresenta alta similaridade com MgAtr4 de Mycosphaerella graminicola e PMR1 de Penicillium digitatum, ambos transportadoresABC envolvidos no efluxo de drogas. O gene atrE tem uma única cópia no genoma de T. rubrum e sua transcrição é induzi da após o tratamento com brometo de etídeo, cetoconazol, ciclohexamida, fluconazol, griseofulvina e itraconazol. A análise de um mutante com este gene nocauteado mostrou que o mesmo apresenta um aumento na sensibilidade à brometo de etídeo, cetoconazol e ciclohexamida, o que demonstra que este gene tem um importante papel na ... resposta da célula a estes agentes inibidores. Além disso, a linhagem 'delta'atrE apresentou menores níveis de secreção enzimática e menor desenvolvimento sobre fragmentos de unha em relação à linhagem selvagem, o que sugere a participação do gene atrE na secreção de enzimas e na patogenicidade de T. rubrum. A utilização da técnica de eletroforese em campo pulsado permitiu a separação de pelo menos 5 bandas cromossômicas. O tamanho dessas bandas variou entre 3,0 e 5,8 Mb e juntas constituem um genoma de aproximadamente 22,05 Mb. Experimentos de hibridação permitiram a localização do gene atrE no cromossomo denominado III. Esses dados são de grande importância em fungos que não possuem ciclo sexual descrito, como T. rubrum, nos quais estudos genéticos de natureza clássica não podem ser realizados. Finalmente, a realização da análise em série da expressão gênica (SAGE) em condições normais de cultivo (meio de cultura Sabouraud pH 5,7) gerou aproximadamente 13.218 tags, as quaiscorrespondem a 667 genes expressos. Desse total, 84 foram anotados, o que permitiu a identificação de alguns fatores de virulência que deverão ser validados experimentalmente. Esse é o primeiro relato de estudo de expressão gênica em larga escala neste dermatófito
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2003
- Data da defesa: 17.10.2003
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ABNT
CERVELATTI, Eliane Patrícia. Aspectos moleculares da resistência à drogas e patogenicidade de Trichophyton rubrum: identificação e caracterização funcional de um transportador do tipo ABC e análise do transcriptoma deste dermatófito. 2003. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2003. . Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Cervelatti, E. P. (2003). Aspectos moleculares da resistência à drogas e patogenicidade de Trichophyton rubrum: identificação e caracterização funcional de um transportador do tipo ABC e análise do transcriptoma deste dermatófito (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Cervelatti EP. Aspectos moleculares da resistência à drogas e patogenicidade de Trichophyton rubrum: identificação e caracterização funcional de um transportador do tipo ABC e análise do transcriptoma deste dermatófito. 2003 ;[citado 2024 abr. 23 ] -
Vancouver
Cervelatti EP. Aspectos moleculares da resistência à drogas e patogenicidade de Trichophyton rubrum: identificação e caracterização funcional de um transportador do tipo ABC e análise do transcriptoma deste dermatófito. 2003 ;[citado 2024 abr. 23 ]
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