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Estudos funcionais do mecanismo de regulação do gene BHC4-1 (2003)

  • Authors:
  • Autor USP: BASSO JUNIOR, LUIZ ROBERTO - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBP
  • Subjects: REGULAÇÃO GÊNICA; BIOLOGIA CELULAR; BIOLOGIA MOLECULAR
  • Language: Português
  • Abstract: O gene BhC4-1 do pufe de DNA C4 é amplificado e abundantemente expresso na glândula salivar de Bradysia hygida, no final do último estágio larval. Com o objetivo de investigar a correlação entre variações nos títulos endógenos de ecdisteróides e a indução da expressão de BhC4-1 na glândula salivar, os títulos hormonais foram quantificados em diferentes tempos do último estágio larval, usando um radioimunoensaio altamente sensível. Dois picos de ecdisona foram detectados; um pequeno pico no estágio E 1, o qual deve corresponder ao commitment peak, e um segundo pico mais amplo no estágio E7, o qual corresponde aos maiores títulos medidos (2,34x10¯?M). A expansão máxima do rufe de DNA C4 correlaciona-se com o segundo pico de ecdisona e a regressão do pufe acompanha a diminuição dos títulos hormonais. Estudos em Drosophila transgênica mostraram que a regulação de BhC4-1 é conservada em Drosophila e que sua ativação é uma resposta tardia ao pico de ecdisona que induz a formação do pupário. Com o objetivo de estender a caracterização do promotor de BhC4-1, nós analisamos o padrão de transcrição dirigido por diferentes fragmentos da região 5 de BhC4-1 em linhagens transgênicas de Drosophila, utilizando ensaios de proteção à RNase. Os resultados confirmam observações, prévias baseadas em ensaios histoquímicos de que um fragmento de 226 pb (-186 a +40) do promotor é suficiente para regular a expressão de BhC4-1 na glândula salivar, na transição larva- prépupa. Nestetrabalho também investigamos o papel de reguladores chaves na transmissão do sinal hormonal no controle de BhC4-1, utilizando linhagens carregando alelos mutarites representativos de BR-C, E74 e E75, as quais foram cruzadas com linhagens transgênicas carregando genes quiméricos BhC4-1-1acZ. Os resultados indicam que a isoforma A de E75 e a isoforma Z3 de BR-C exercem papel essencial na indução de BhC4-1 na glândula salivar. A expressão .. de BhC4-1-1acZ é reduzida severamente no mutarite E75A?? e é quase completamente abolida em background 2Bc?. A correta indução de BhC4-1-1acZ em mutante 2Bc? é resgatada pela expressão ectópica da isoforma Z3 de BR-C, mas não pela expressão ectópica da isoforma Z2. Nos genótipos mutantes br? e rbp? de BR-C ou E74A e E74B a indução de BhC4-1acZ na glândula salivar é bem menos afetada. A expressão ectópica de ZI ou Z4 no mutante rbp? resgata o efeito da perda da função rbp+. Considerando a falta de mutante específico para Z4, não é possível definir se ZI e Z4, ou somente uma destas isoformas de BR-C participa na regulação de BhC4-1. Juntos estes resultados indicam que os produtos dos três genes iniciais BR-C. E74 e E75A participam da ativação de BhC4-1, mas não estão envolvidos na restrição da express,ão ao período prépupal, nem na determinação da especificidade tecidual da expressão de BhC4-1. O efeito de mutações em BR-C na indução ectópica de BhC4-1-1acZ na glândula anelar de Drosophila nas linhagenstransformadas com a construção BhC4-1/lacZ (-3314 a +40) também foi analisado. Os resultados mostram que BR-C não é necessário para a ativação de BhC4-1-1acZ na glândula anelar de prépupa indicando que diferentemente do que ocorre na glândula salivar a expressão na glândula anelar não deve ser induzi da por ecdisona
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 25.04.2003

  • How to cite
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    • ABNT

      BASSO JÚNIOR, Luíz Roberto; PAÇÓ-LARSON, Maria Luisa. Estudos funcionais do mecanismo de regulação do gene BHC4-1. 2003.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2003.
    • APA

      Basso Júnior, L. R., & Paçó-Larson, M. L. (2003). Estudos funcionais do mecanismo de regulação do gene BHC4-1. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Basso Júnior LR, Paçó-Larson ML. Estudos funcionais do mecanismo de regulação do gene BHC4-1. 2003 ;
    • Vancouver

      Basso Júnior LR, Paçó-Larson ML. Estudos funcionais do mecanismo de regulação do gene BHC4-1. 2003 ;


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