Sistemas micelares de duas fases aquosas aplicados à purificação de enzimas (2003)
- Authors:
- Autor USP: YAGUI, CARLOTA DE OLIVEIRA RANGEL - FCF
- Unidade: FCF
- Sigla do Departamento: FBT
- Subjects: ENZIMAS; ENZIMOLOGIA (APLICAÇÕES INDUSTRIAIS); BIOPROCESSOS (APLICAÇÕES INDUSTRIAIS); BIOTECNOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: A partição das enzimas glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) e uroquinase (UK) em sistemas micelares de duas fases aquosas foi investigada, teórica e experimentalmente. Inicialmente, a partição de G6PD em sistema micelar de duas fases aquosas composto pelo tensoativo não-iônico 'C IND.10''E IND.4' (óxido de n-deciltetraetileno) foi estudada. Observou-se uma partição governada primariamente por interações repulsivas estéricas, do tipo "volume de exclusão", sendo a G6PD recuperada preferencialmente na fase inferior do sistema, pobre em micelas, resultando em valores de 'KIND.G6PD' inferiores a 1,0. Os tensoatívos catiônicos 'C IND.n'TAB (brometos de alquiltrimetilamônio, n= 8, 10 e 12) foram adicionados ao tensoativo 'C IND.10''E IND.4', de modo a formar sistemas micelares mistos (não-iônico/catiônico) de duas fases aquosas e atrair a G6PD de carga efetiva negativa para a fase superior, rica em micelas positivamente carregadas. Os coeficientes de partição obtidos nos sistemas 'C IND.10''EIND.4'/'CIND.n'TAB/tampão foram no mínimo 2,5 vezes maiores que os correspondentes no sistema 'C IND.10''E IND.4'/tampão mantendo-se o volume de exclusão constante. De uma forma geral, o sistema micelar misto 'C IND.10''E IND.4'/'C IND.10'TAB/tampão forneceu o melhor 'K IND.G6PD' = 7,7, com um rendimento de G6PD na fase superior de '71 POR CENTO'. A adição de ligantes de afinidade (inibidores enzimáticos) ao sistema de duas fases aquosas 'C IND.10''E IND.4'/tampãopara purificação de UK e G6PD também foi estudada. Não foram observadas diferenças significativas no perfil de partição da UK na presença ou não do ligante p-aminobenzamidina, o qual apresentou partição uniforme entre as duas fases do sistema, sendo obtidos valores de 'KIND.uK' -'DA ORDEM 0,70' em ambos os casos. Para a G6PD, um pequeno incremento no 'KIND.G6PD' foi observado na presença dos ligantes de afinidade cibacron blue e procion red, porém resultando ainda em ) valores inferiores a 1. Portanto, a utilização de inibidores enzimáticos livres em solução como ligantes de afinidade para purificação de UK e G6PD em sistema micelar 'C IND.10''E IND.4'/tampão de duas fases aquosas não resultou em diferenças significativas no perfil de partição das enzimas. Por fim, um sistema de purificação em dois estágios, sendo o primeiro constituído de sistema micelar não-iônico ('C IND.10''E IND.4') de duas fases aquosas e o segundo de sistema micelar misto ('C IND.10''E IND.4'/'C IND.10'TAB) de duas fases aquosas foi aplicado para a purificação de G6PD presente em homogeneizado celular de Saccharomyces cerevisiae, sendo obtido um rendimento final de G6PD de '59 POR CENTO', com um fator de purificação de 1,3
- Imprenta:
- Data da defesa: 30.07.2003
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ABNT
RANGEL-YAGUI, Carlota de Oliveira. Sistemas micelares de duas fases aquosas aplicados à purificação de enzimas. 2003. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2003. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9134/tde-03072008-135902/. Acesso em: 16 ago. 2024. -
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Rangel-Yagui, C. de O. (2003). Sistemas micelares de duas fases aquosas aplicados à purificação de enzimas (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9134/tde-03072008-135902/ -
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Rangel-Yagui C de O. Sistemas micelares de duas fases aquosas aplicados à purificação de enzimas [Internet]. 2003 ;[citado 2024 ago. 16 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9134/tde-03072008-135902/ -
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