Análise molecular da endopeptidase 24.25 (EC 3.4.24.15) nuclear (2003)
- Authors:
- Autor USP: FERRO, EMER SUAVINHO - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: HISTOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: INTRODUÇÃO / OBJETIVOS:Embora a endopeptidase 24.15 (EC3.4.24.15; EP24.15) seja descrita como uma proteína predominantemente citosólica, estudos imunohistoquímicos (Fontenele-Neto et al., 2001) demonstraram uma fração majoritária presente no núcleo de neurônios. Portanto, este trabalho tem como principais objetivos analisar por meio de mutações sítio dirigidas os requerimentos estruturais mínimos para a localização nuclear da EP24.15 e analisar através da técnica de imunoprecipitação da cromatina possíveis regiões de interação desta proteína com o DNA. MÉTODOS E RESULTADOS: Geração dos mutantes:Primers foram sintetizados contendo mutação no aminoácido 237 da EP24.15 trocando uma Arg por um Glu, na tentativa de modificar uma região considerada como possível sinal de localização nuclear. Este mutante foi obtido através de reação em cadeia de polimerase (utilizando como template o plasmídeo pGFP contendo EP24.15 selvagem), transformação em E. coli (XL1-blue), miniprep e sequenciamento.Em uma próxima etapa o mutante será transfectado em células HEK293 para observação do seu tráfego subcelular. Imunoprecipitação da cromatina: A fração nuclear obtida de células de homogenato de cérebro de ratos adultos e linhagens de células C6 (glioma de rato) fixados em formaldeído 1% (para manter o cross linking entre DNA e proteinas nucleares), foi incubada com anticorpo anti-EP24.15 acoplado a coluna contendo proteína A imobilizada. A ligaçãoEP24.15-DNA foi revertida com tampão contendo a própria EP24.15, e os fragmentos de DNA foram purificados, clonados e sequenciados. As seqüências foram analisadas no GeneBank sugerindo que a EP24.15 se liga a regiões promotoras específicas. CONCLUSÃO. Esses resultados corroboram dados anteriores de que a EP24.15 nuclear esta associada à cromatina, e sugerem que esta interação seja específica para determinadas seqüências de nucleotídeos
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Pesquisa do ICB/USP
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2003
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV
-
ABNT
CASTRO, Leandro Mantovani e FERRO, Emer Suavinho. Análise molecular da endopeptidase 24.25 (EC 3.4.24.15) nuclear. 2003, Anais.. São Paulo: Comissão de Pesquisa do ICB/USP, 2003. . Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Castro, L. M., & Ferro, E. S. (2003). Análise molecular da endopeptidase 24.25 (EC 3.4.24.15) nuclear. In Resumos. São Paulo: Comissão de Pesquisa do ICB/USP. -
NLM
Castro LM, Ferro ES. Análise molecular da endopeptidase 24.25 (EC 3.4.24.15) nuclear. Resumos. 2003 ;[citado 2024 abr. 19 ] -
Vancouver
Castro LM, Ferro ES. Análise molecular da endopeptidase 24.25 (EC 3.4.24.15) nuclear. Resumos. 2003 ;[citado 2024 abr. 19 ] - Secretion of metalloendopeptidase 24.15 (EC 3.4.24.15)
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