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Profenoloxidase de Apis mellifera: clonagem parcial, caracterização e expressão nas castas e sexos (2003)

  • Authors:
  • Autor USP: LOURENCO, ANETE PEDRO - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RGE
  • Subjects: ABELHAS; GENES DE INSETOS
  • Language: Português
  • Abstract: Em insetos, a fenoloxidase (PO) desempenha importantes funções como participação na pigmentação e esclerotização, e ainda na cicatrização de ferimentos e resposta imune. Essa enzima é encontrada na hemolinfa, como também na cutícula, na forma de um precursor, a profenoloxidase (proPO). Apesar de ter sido estudada em inúmeros insetos, suas diferentes propriedades, expressão diferencial nos sexos e castas e idades, ou em relação à modulação hormonal durante o desenvolvimento, estão ainda por serem investigadas em Apis mellifera. A isolação do cDNA da proPO de A. mellifera permitiu a caracterização e o seqüenciamento do mRNA e o estudo da expressão desse gene durante o desenvolvimento.. Utilizando-se um primer reverso degenerado, desenhado próximo à extremidade 3' foi sintetizada a primeira cadeia de cDNA por RT, a partir de RNA poli (A)+ de hemócitos de pupas Pbd (pupa de olho escuro com cutícula fortemente pigmentada), fase em que a enzima tem maior expressão. Com esse cDNA, foi realizada uma PCR com os primers degenerados reverso (PPO-R) e o direto (PPO-F), resultando um fragmento de cerca de 1,3 kb que foi, posteriormente, clonado e seqüenciado. Os trechos seqüenciados foram analisados pelos programas Phred/Phrap/Consed, que constituíram um consenso de 1.319 nucleotídeos. Quando o fragmento foi analisado pelo programa BLAST-P, verificou-se a existência de uma grande similaridade com as ProPOs de outros insetos, como por exemplo com a de Sarcophagabullata, cuja identidade foi de 65%. A análise por Neighbor joining mostrou inclusive a proximidade desse trecho com as POs de um outro Hymenoptera, Pimpla hypochondriaca. Análises posteriores dessa seqüência revelaram a presença de quatro domínios bastante conservados, entre eles os sítios de ligação ao cobre CuA e CuB, característicos da proPO de artrópodos. Por digestão com enzima específica, obtiveram-se dois fragmentos, de 400 e 900 pb, que foram .. usados como sondas nos experimentos de Northern e Southern blot. Primeiramente, as sondas foram usadas para detectar o mRNA da proPO com o uso de Northern blot. Neste caso somente um transcrito foi identificado, com peso aproximado de 4,7 kb. Utilizando-se RT-PCR semiquantitativa para estudo de expressão diferencial nos sexos e nas castas, foi observado maior número de transcritos em operárias, seguido de rainhas e zangões. A expressão de AmProPO durante o desenvolvimento nas fases larvais, pupais e adultos até 15 dias, também foi analisada. Nesse caso, maior quantidade de transcritos foi observado em larvas e adultos. A menor quantidade de transcritos foi detectada em pupas, com exceção de Pbd. Pode-se observar ainda uma provável transcrição do gene para proPO em tegumento do tórax, ovário de rainha e cabeça de pupa. A análise por Southern blot demonstrou a existência de apenas um gene para proPO. A partir desses resultados pode-se concluir que o fragmento de 1,3 kb corresponde realmente aocDNA para proPO de A. mellifera, o que permitiu a verificação de expressão desse gene nos sexos e castas dessas abelhas, ao longo do desenvolvimento ontogenético, abrindo novas possibilidades para investigação de novas funções para essa enzima
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 26.05.2003

  • How to cite
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    • ABNT

      LOURENÇO, Anete Pedro; SIMÕES, Zilá Luz Paulino. Profenoloxidase de Apis mellifera: clonagem parcial, caracterização e expressão nas castas e sexos. 2003.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2003.
    • APA

      Lourenço, A. P., & Simões, Z. L. P. (2003). Profenoloxidase de Apis mellifera: clonagem parcial, caracterização e expressão nas castas e sexos. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Lourenço AP, Simões ZLP. Profenoloxidase de Apis mellifera: clonagem parcial, caracterização e expressão nas castas e sexos. 2003 ;
    • Vancouver

      Lourenço AP, Simões ZLP. Profenoloxidase de Apis mellifera: clonagem parcial, caracterização e expressão nas castas e sexos. 2003 ;


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