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Análise funcional da endopeptidases 24.15 (EC 3.4.24.15) e de seus mutantes com capacidade reduzida de interação à membrana plasmática (2003)

  • Authors:
  • Autor USP: FERRO, EMER SUAVINHO - ICB
  • Unidade: ICB
  • Assunto: HISTOLOGIA
  • Language: Português
  • Abstract: A metalopeptidase EC3.4.24.15 (EP24.15) cuja função está associada a degradação de peptídeos tanto no meio intra como no extracelular, é altamente expressa no cérebro e tecidos endócrinos. Nosso objetivo no presente trabalho é investigar a associação EP24.15-membrana plasmática, mediada pelo cálcio, que poderia estar associada com a secreção da enzima na presença de baixas concentrações de cálcio, bem como investigar o papel da EP24.15 secretada. A secreção da EP24.15 por células C6 de glioma de ratos é linearmente estimulada pela redução da concentração de cálcio no meio extracelular, sem que isso afete a quantidade de enzima total. A análise em microscopia confocal revelou que há uma marcação discreta pra a EP24.15 na membrana plasmática das células C6 quando estas são previamente incubadas em meio contendo cálcio. Possíveis sítios de ligação para o cálcio na EP24.15 identificados por análise computacional foram modificados por mutação sítio-dirigida. Esses mutantes foram expressos em E. coli e purificados a homogeneidade por cromatografia de afinidade.Foram observadas pequenas diferenças entre os mutantes e a enzima selvagem quando comparadas as atividades enzimáticas, na presença ou ausência de cálcio.No entanto, por dicroísmo circular observamos que na presença de cálcio as mutações D93A e D93/159A afetam distintamente a estrutura secundária da EP24.15. Analises em microscopia confocal revelaram que esses mesmos mutantes têmuma habilidade reduzida de interação com a membrana plasmática das células C6.Em paralelo, observamos uma inibição na proliferação de células C6, quando as mesmas são previamente tratadas com JA2, um potente inibidor da EP24.15 que não penetra nas células.A presença extracelular da EP24.15 é importante para a proliferação das células C6 de glioma de rato.Após as mutações sítio dirigidas, a EP24.15 apresenta alterações na sensibilidade ao cálcio e na interação com a membrana plasmática das células C6 de glioma de ratos.A interação cálcio-dependente da EP24.15 com a membrana plasmática pode ter importante relevância durante sua secreção, bem como para sua função no metabolismo extracelular de peptídeos
  • Imprenta:
  • Source:
  • Conference titles: Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV

  • How to cite
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    • ABNT

      GARRIDO, Paula Amaral Gurgel; FERRO, Emer Suavinho; RODRIGUES, Cláudia C.; SHIDA, Cláudio S.; COLQUHOUN, Alison. Análise funcional da endopeptidases 24.15 (EC 3.4.24.15) e de seus mutantes com capacidade reduzida de interação à membrana plasmática. Anais.. São Paulo: Comissão de Pesquisa do ICB/USP, 2003.
    • APA

      Garrido, P. A. G., Ferro, E. S., Rodrigues, C. C., Shida, C. S., & Colquhoun, A. (2003). Análise funcional da endopeptidases 24.15 (EC 3.4.24.15) e de seus mutantes com capacidade reduzida de interação à membrana plasmática. In Resumos. São Paulo: Comissão de Pesquisa do ICB/USP.
    • NLM

      Garrido PAG, Ferro ES, Rodrigues CC, Shida CS, Colquhoun A. Análise funcional da endopeptidases 24.15 (EC 3.4.24.15) e de seus mutantes com capacidade reduzida de interação à membrana plasmática. Resumos. 2003 ;
    • Vancouver

      Garrido PAG, Ferro ES, Rodrigues CC, Shida CS, Colquhoun A. Análise funcional da endopeptidases 24.15 (EC 3.4.24.15) e de seus mutantes com capacidade reduzida de interação à membrana plasmática. Resumos. 2003 ;


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