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Subclonagem, expressão e avaliação da atividade biológica do domínio extracelular da subunidade 2 do receptor do interferon alfa (2003)

  • Authors:
  • Autor USP: YOON, SUN OK - FCF
  • Unidade: FCF
  • Sigla do Departamento: FBC
  • Subjects: DOENÇAS IMUNOLÓGICAS; RECEPTORES CELULARES; EXPRESSÃO GÊNICA; IMUNOLOGIA; BIOLOGIA MOLECULAR
  • Language: Português
  • Abstract: Foi produzida a proteína recombinante do domínio extracelular da subunidade 2 do receptor do IFN-´ALFA´ em forma de proteína de fusão com a glutatione-S-transferase (GST-IFNAR2cEC) em E. colí, com o objetivo de avaliar seu efeito bloqueador sobre a ação do IFN-´ALFA´. A GST-IFNAR2cEC de forma solúvel, com peso molecular 54 kDa, foi obtida quando a proteína recombinante foi expressa a 25 ºC por índução de IPTG e foi lísada por French Press. A avaliação do efeito bloqueador da GST-IFNAR2cEC foi feita utilizando-se 3 métodos: 1) Ensaio antiproliferativo com células Daudi, 2) ensaio antiviral com células Hep 2/c e vírus encefalomiocarditis, e 3) expressão gênica semi-quantitativa do STAT 1 (transdutor de sinal e ativador de transcrição) e da 2', 5'-oligoadenilato sintetase (OAS) pela RT-PCR duplex nas células Daudi e Hep 2/c. A GST-IFNAR2cEC, mesmo a 420 nM, não inibiu as atividades antiproliferativa e antiviral de 24,5 pM e 49 pM de rlFN-´ALFA´2 provavelmente devido à sua ineficiência na competição com o IFNAR da superfície celular durante o longo período de incubação nos ensaios realizados. A expressão gênica do STAT 1 não foi inibida pela GST- IFNAR2cEC nas células Daudi e Hep 2/c, porém inibiu-se a da 2', 5'-OAS. Estes resultados sugerem que a expressão gênica do STAT 1 é independente da ligação do IFN-´ALFA´ com a IFNAR 2c, e que a da 2', 5'-OAS é dependente dessa ligação nessas células
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 28.03.2003
  • Acesso à fonte
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    • ABNT

      YOON, Sun-Ok; HIRATA, Mario Hiroyuki. Subclonagem, expressão e avaliação da atividade biológica do domínio extracelular da subunidade 2 do receptor do interferon alfa. 2003.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2003. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-26102004-225537/ >.
    • APA

      Yoon, S. -O., & Hirata, M. H. (2003). Subclonagem, expressão e avaliação da atividade biológica do domínio extracelular da subunidade 2 do receptor do interferon alfa. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-26102004-225537/
    • NLM

      Yoon S-O, Hirata MH. Subclonagem, expressão e avaliação da atividade biológica do domínio extracelular da subunidade 2 do receptor do interferon alfa [Internet]. 2003 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-26102004-225537/
    • Vancouver

      Yoon S-O, Hirata MH. Subclonagem, expressão e avaliação da atividade biológica do domínio extracelular da subunidade 2 do receptor do interferon alfa [Internet]. 2003 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-26102004-225537/


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