Estrutura cristalográfica da enzima hipoxantina-guanina foforribosiltransferase (HGPRT) de Leishmania tarentolae complexada com GMP (2003)
- Authors:
- Autor USP: MONZANI, PAULO SERGIO - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FFI
- Subjects: BIOLOGIA MOLECULAR; ENZIMAS; LEISHMANIA
- Language: Português
- Abstract: O presente trabalho teve como objetivos a clonagem, expressão e purificação da proteína HGPRT de Leishmania tarentolae, para a caracterização e cristalização dessa enzima, a fim do seu estudo estrutural e funcional. O gene da HGPRT foi amplificado a partir de uma biblioteca genômica de Leishmania tarentolae, da cepa UC Lambda ZAP Express BamHI-Sal3AI. Esse gene foi clonado no vetor de expressão 29a(+) e usado na transformação da bactéria Escherichia coli BL21(DE3). Esse sistema de expressão apresentou uma superexpressão da proteína recombinante, que foi purificada em cromatografia de troca iônica, com o uso da coluna de troca aniônica POROS 20HQ. A proteína purificada foi utilizada para sua caracterização, como a determinação das constantes cinéticas ('K IND.m', 'V IND.max' e 'k IND.cat') para os diferentes substratos. A proteína foi encontrada como dímero em solução e com o pI de aproximadamente 8,2. Além disso, essa proteína foi utilizada nos ensaios de cristalização pelo método de difusão de vapor em gota suspensa. Os cristais obtidos foram utilizados nos testes de difração de raios-X, sendo coletado um conjunto de dados no Laboratório Nacional de Luz Síncrotron. Os dados de difração de raios-X foram processados com o uso do pacote de programa HKL. A resolução da estrutura cristalográfica foi obtida pelo método de substituição molecular através do programa AMoRe. Para o refinamento da estrutura foram utilizados os programas de refinamento automático CNS eREFMAC, e a manipulação na estação gráfica foi realizada através do programa O. A estrutura da HGPRT foi resolvida a 2,1 'angstron' de resolução com os fatores de concordância 'R IND.work' e 'R IND.free' finais de 17,34 e 21,53%, respectivamente
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2003
- Data da defesa: 20.03.2003
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ABNT
MONZANI, Paulo Sérgio. Estrutura cristalográfica da enzima hipoxantina-guanina foforribosiltransferase (HGPRT) de Leishmania tarentolae complexada com GMP. 2003. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2003. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-24062008-163341/. Acesso em: 25 abr. 2025. -
APA
Monzani, P. S. (2003). Estrutura cristalográfica da enzima hipoxantina-guanina foforribosiltransferase (HGPRT) de Leishmania tarentolae complexada com GMP (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-24062008-163341/ -
NLM
Monzani PS. Estrutura cristalográfica da enzima hipoxantina-guanina foforribosiltransferase (HGPRT) de Leishmania tarentolae complexada com GMP [Internet]. 2003 ;[citado 2025 abr. 25 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-24062008-163341/ -
Vancouver
Monzani PS. Estrutura cristalográfica da enzima hipoxantina-guanina foforribosiltransferase (HGPRT) de Leishmania tarentolae complexada com GMP [Internet]. 2003 ;[citado 2025 abr. 25 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-24062008-163341/
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